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Immunohistochimie en couleurs (IHC)

L'immunohistochimie en couleurs (IHC) est une technique employée pour souiller les antigènes multiples dans une partie de tissu. Des nécessaires particuliers sont conçus pour des objectifs trois ou plus différents et sont employés pour déterminer l'organisme spatial des molécules particulières dans les tissus sains et malades.

Tissus fluorescents souillés utilisant des techniques dKarl Dupont | Shutterstock

Principes d'IHC en couleurs

L'immunohistochimie est utilisée généralement pour concevoir la distribution d'une composante d'objectif et de son intensité. Le sous-programme IHC est limité par le nombre de couleurs qui peuvent être employées, signifiant que des parties multiples doivent être prises, souillées et recouvertes. Ce n'est pas toujours possible, par exemple, s'il y a seulement un petit échantillon procurable ou un manque de temps.

L'IHC en couleurs résout ce problème et permet la visualisation de l'architecture de tissu, la distribution spatiale des éléments cellulaires, et les signes Co-exprimés. L'immunofluorescence a été une méthode favorisée pour trouver plusieurs bornes en un tissu, mais à la différence d'IHC en couleurs, elle n'est pas permanente. Ceci permet à des chercheurs de revisiter à plusieurs reprises des échantillons sans changer les résultats de souillure. L'IHC peut également montrer des bornes relativement à la morphologie complète de tissu.

Types d'IHC en couleurs

Il y a un certain nombre de types d'IHC en couleurs, y compris le brightfield et la microscopie à fluorescence. La microscopie de Brightfield représente une forme élémentaire de la microscopie qui exige des chromogènes ou des paires d'enzymes à déposer pour l'IHC en couleurs. C'est suffisant pour discerner des types de cellules, mais est moins convenable pour la caractérisation intracellulaire. Des teintures de Counterstaining peuvent être employées pour améliorer en couleurs dans la microscopie de brightfield, telle que le vert méthylique.

Un des problèmes majeurs avec ce type d'IHC en couleurs est de s'assurer que les enzymes ne croisent pas réagissent. En raison de ceci, les protocoles sont habituellement de main-d'oeuvre et ont le risque de superposer de couleurs. Le caractère pratique de dépasser trois couleurs différentes est limité.

La microscopie à fluorescence est un peu plus complexe, et dans les dossiers de contexte d'IHC les différentes crêtes spectrales de la lumière sur un fond foncé, car les fluorophores dans les échantillons sont excités par une longueur d'onde.

L'IHC se fonde sur la liaison d'un anticorps à un antigène d'intérêt, et peut être effectué par un procédé direct ou indirect. Dans la fluorescence directe, un fluorophore est conjugué à un anticorps primaire directement, alors que dans la fluorescence indirecte, le fluorophore est conjugué à un anticorps qui est spécifique pour l'anticorps primaire.

Plusieurs fluorophores sont procurables pour l'IHC, en plus des nanocrystals développés récemment de point de tranche de temps qui ont des crêtes plus étroites d'émission, signifiant qu'il y a moins de superposition. Cependant, les jeux d'excitation/filtre d'émission peuvent matériel limiter la capacité pour l'IHC en couleurs. Type, c'est les jeux de filtre qui limitent les bornes fluorophore à trois couleurs, mais ceci peut être amendé pour comprendre plus.

Comment l'IHC en couleurs est-il appliqué dans la recherche ?

La fluorescence IHC en couleurs avec quatre fluorophores différents ont été appliquées pour regarder cela l'environnement de tumeur dans le cancer gastrique. Ceci a employé la méthode de marquage indirecte mentionnée ci-dessus, consécutivement, applifying le signe d'objectif.

De plus, la capacité de concevoir plusieurs points de reprise immunisés simultanément dans un tissu cancéreux peut élucider leurs profils d'expression sur des cellules immunitaires et d'autres cellules dans une tumeur.

En conclusion, la visualisation de la Co-expression des molécules de signalisation peut être importante pour promouvoir notre compréhension du cycle cellulaire. La nature transitoire du cycle cellulaire a récent suscité l'attention, et l'opportunité de capter simultanément ces bornes du cycle cellulaire peut aider à élucider des contrôles d'étape progressive de cycle.

Futurs points de vue

En dépit de elle est la réussite, IHC en couleurs vient avec ses propres limitations. Avec des couleurs accrues dans une partie de tissu, les échantillons peuvent être difficiles d'interpréter le mélange donné de couleurs, comme se produit souvent parce que la fluorescence est employée souvent. Quelques types de maladie des points blancs en couleurs portent également le risque d'autofluorescence par le tissu lui-même, qui rend l'évaluation visuelle quelque peu difficile.

On lui a proposé que la microscopie à balayage laser confocal puisse être employée, de mesurer principalement le présent de fluorescence. La microscopie spectrale de ce genre peut trouver les éventails de plusieurs bornes indépendamment, qui les empêche de se mélanger. Cette procédure spécifique a été appliquée au tissu d'amygdale, avec cinq couleurs différentes.

Last Updated: Jan 3, 2019

Sara Ryding

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Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

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