Aviso: Esta página é uma tradução automática da página original em inglês. Por favor note uma vez que as traduções são geradas por máquinas, não tradução tudo será perfeita. Este site e suas páginas da Web destinam-se a ler em inglês. Qualquer tradução deste site e suas páginas da Web pode ser imprecisas e imprecisos no todo ou em parte. Esta tradução é fornecida como uma conveniência.

Immunohistochemistry da Multi-cor (IHC)

o immunohistochemistry da Multi-cor (IHC) é uma técnica usada para manchar antígenos múltiplos dentro de uma secção do tecido. Os jogos típicos são projectados para uns alvos três ou mais diferentes e são usados para determinar a organização espacial de moléculas particulares dentro dos tecidos saudáveis e doentes.

Os tecidos fluorescentes mancharam usando técnicas de IHC - por Carl Du PontCarl Du Pont | Shutterstock

Princípios da multi-cor IHC

O Immunohistochemistry é de uso geral visualizar a distribuição de um componente do alvo e de sua intensidade. A rotina IHC é limitada pelo número de cores que podem ser usadas, significando que as secções múltiplas devem ser tomadas, manchado e coberto. Isto não é sempre possível, por exemplo, se há somente uma amostra pequena disponível ou uma falta de tempo.

a Multi-cor IHC resolve este problema e permite o visualização da arquitetura do tecido, a distribuição espacial de componentes celulares, e sinais co-expressados. A imunofluorescência foi um método favorecido para detectar diversos marcadores em um tecido, mas ao contrário da multi-cor IHC, não é permanente. Isto permite que os pesquisadores revisitem repetidamente amostras sem mudar os resultados de mancha. IHC pode igualmente mostrar marcadores relativo à morfologia detalhada do tecido.

Tipos da multi-cor IHC

Há um número de tipos da multi-cor IHC, incluindo a microscopia do brightfield e de fluorescência. A microscopia de Brightfield representa um formulário elementar da microscopia que exige cromogéneos ou pares da enzima a ser depositados para IHC multicolorido. Isto é suficiente para distinguir tipos da pilha, mas é menos apto para a caracterização intracelular. As tinturas de Counterstaining podem ser usadas para aumentar multicolorido na microscopia do brightfield, tal como o verde metílico.

Uma das questões principais com este tipo de IHC multicolorido é assegurar-se de que as enzimas não se cruzem reajam. Em conseqüência disto, os protocolos são geralmente labor - intensivo e têm o risco de sobreposição das cores. A praticabilidade de exceder três cores diferentes é limitada.

A microscopia de fluorescência é um pouco mais complexa, e nos registros do contexto de IHC os picos espectrais diferentes da luz contra um fundo escuro, porque os fluorophores nas amostras são entusiasmado por um comprimento de onda.

IHC confia no emperramento de um anticorpo a um antígeno do interesse, e pode ser realizado com um processo directo ou indirecto. Na fluorescência directa, um fluoróforo é conjugado a um anticorpo preliminar directamente, visto que na fluorescência indirecta, o fluoróforo é conjugado a um anticorpo que seja específico para o anticorpo preliminar.

Diversos fluorophores estão disponíveis para IHC, além do que os nanocrystals recentemente desenvolvidos do ponto do quantum que têm uns picos mais estreitos da emissão, significando que há menos sobreposição. Contudo, os grupos da excitação/filtro da emissão podem fisicamente restringir a capacidade para IHC multicolorido. Tipicamente, é os grupos do filtro que limitam marcadores fluoróforos a três cores, mas este pode ser alterado para incluir mais.

Como a multi-cor IHC é aplicada na pesquisa?

A fluorescência IHC multicolorido com quatro fluorophores diferentes foi aplicada para olhar aquela o ambiente do tumor no cancro gástrica. Isto usou o método de rotulagem indirecto acima mencionado, por sua vez, applifying o sinal do alvo.

Além, a capacidade para visualizar diversos pontos de verificação imunes simultaneamente em um tecido cancerígeno pode explicar seus perfis da expressão em pilhas imunes e em outras pilhas dentro de um tumor.

Finalmente, visualizar a co-expressão de moléculas da sinalização pode ser importante para promover nossa compreensão do ciclo de pilha. A natureza transitória do ciclo de pilha tem recebido recentemente a atenção, e a oportunidade de capturar simultaneamente estes marcadores do ciclo de pilha pode ajudar a explicar controles da progressão do ciclo.

Perspectivas futuras

Apesar dela são os sucessos, IHC multicolorido vêm com suas próprias limitações. Com cores aumentadas em uma secção do tecido, as amostras podem ser difíceis interpretar a mistura dada das cores, como acontecem frequentemente porque a fluorescência é usada frequentemente. Alguns tipos de ICH multicolorido igualmente trazem o risco de autofluorescence pelo tecido próprio, que faz a avaliação visual um tanto difícil.

Sugeriu-se que a microscopia de exploração confocal do laser pudesse ser usada, para determinar principalmente o presente da fluorescência. A microscopia espectral deste tipo pode detectar os espectros de diversos marcadores independente, que impede que misturem. Este procedimento específico foi aplicado ao tecido da amígdala, com cinco cores diferentes.

Fontes

Last Updated: Jan 3, 2019

Sara Ryding

Written by

Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Ryding, Sara. (2019, January 03). Immunohistochemistry da Multi-cor (IHC). News-Medical. Retrieved on April 19, 2021 from https://www.news-medical.net/life-sciences/Multi-color-Immunohistochemistry-(IHC).aspx.

  • MLA

    Ryding, Sara. "Immunohistochemistry da Multi-cor (IHC)". News-Medical. 19 April 2021. <https://www.news-medical.net/life-sciences/Multi-color-Immunohistochemistry-(IHC).aspx>.

  • Chicago

    Ryding, Sara. "Immunohistochemistry da Multi-cor (IHC)". News-Medical. https://www.news-medical.net/life-sciences/Multi-color-Immunohistochemistry-(IHC).aspx. (accessed April 19, 2021).

  • Harvard

    Ryding, Sara. 2019. Immunohistochemistry da Multi-cor (IHC). News-Medical, viewed 19 April 2021, https://www.news-medical.net/life-sciences/Multi-color-Immunohistochemistry-(IHC).aspx.

Comments

The opinions expressed here are the views of the writer and do not necessarily reflect the views and opinions of News Medical.