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Immunohistochemistry multicolor (IHC)

El immunohistochemistry multicolor (IHC) es una técnica usada para manchar los antígenos múltiples dentro de una sección del tejido. Los estuches típicos se diseñan para objetivos tres o más diversos y se utilizan para determinar la organización espacial de moléculas determinadas dentro de tejidos sanos y enfermos.

Tejidos fluorescentes manchados usando técnicas de IHC - por Carl Du PontCarl Du Pont | Shutterstock

Principios de IHC multicolor

El Immunohistochemistry es de uso general visualizar la distribución de un componente del objetivo y de su intensidad. La rutina IHC es limitada por el número de colores que puedan ser utilizados, significando que las secciones múltiples deben ser tomadas, ser manchadas y ser sobrepuestas. Esto no es siempre posible, por ejemplo, si hay solamente una pequeña muestra disponible o una falta de tiempo.

IHC multicolor resuelve este problema y permite la visualización de la configuración del tejido, la distribución espacial de componentes celulares, y señales co-expresadas. La inmunofluorescencia ha sido un método favorecido para descubrir varios marcadores en un tejido, pero a diferencia de IHC multicolor, no es permanente. Esto permite que los investigadores revisiten en varias ocasiones muestras sin el cambio de los resultados de coloración. IHC puede también mostrar marcadores en relación con la morfología completa del tejido.

Tipos de IHC multicolor

Hay varios tipos de IHC multicolor, incluyendo microscopia del brightfield y de fluorescencia. La microscopia de Brightfield representa una forma elemental de la microscopia que requiere los cromógenos o los pares de la enzima que se depositarán para IHC multicolor. Esto es suficiente para distinguir tipos de la célula, pero es menos conveniente para la caracterización intracelular. Los tintes de Counterstaining se pueden utilizar para aumentar multicolor en microscopia del brightfield, tal como verde metílico.

Uno de los puntos principales con este tipo de IHC multicolor es asegurarse que las enzimas no cruzan reaccionan. Como resultado de esto, los protocolos son generalmente necesitandos mucho trabajo y tienen el riesgo de recubrir de los colores. El sentido práctico de exceder tres diversos colores es limitado.

La microscopia de fluorescencia es un poco más compleja, y en los archivos del contexto de IHC los diversos picos espectrales de la luz contra un fondo oscuro, pues los fluorophores en las muestras son excitados por una longitud de onda.

IHC confía en el atascamiento de un anticuerpo a un antígeno del interés, y se puede realizar con un proceso directo o indirecto. En fluorescencia directa, un fluoróforo se conjuga a un anticuerpo primario directamente, mientras que en fluorescencia indirecta, el fluoróforo se conjuga a un anticuerpo que sea específico para el anticuerpo primario.

Varios fluorophores están disponibles para IHC, además de los nanocrystals recientemente desarrollados del punto del quantum que tienen picos más estrechos de la emisión, significando que hay menos recubrimiento. Sin embargo, los equipos de la excitación/del filtro de la emisión pueden restringir físicamente la capacidad para IHC multicolor. Típicamente, es los equipos del filtro que limitan marcadores fluoróforos a tres colores, pero esto se puede enmendar para incluir más.

¿Cómo IHC multicolor se aplica en la investigación?

La fluorescencia IHC multicolor con cuatro diversos fluorophores se ha aplicado para observar eso el ambiente del tumor en cáncer gástrico. Esto utilizó el método de etiqueta indirecto ya mencionado, a su vez, applifying la señal del objetivo.

Además, la capacidad de visualizar varios puntos de verificación inmunes en un tejido cacerígeno puede aclarar simultáneamente sus perfiles de la expresión en las células inmunes y otras células dentro de un tumor.

Finalmente, la visualización de la co-expresión de las moléculas de la transmisión de señales puede ser importante para fomentar nuestra comprensión del ciclo celular. La naturaleza transitoria del ciclo celular ha recibido recientemente la atención, y la oportunidad de capturar simultáneamente estos marcadores del ciclo celular puede ayudar a aclarar mandos de la progresión del ciclo.

Perspectivas futuras

A pesar de ella son los éxitos, IHC multicolor vienen con sus propias limitaciones. Con colores crecientes en una sección del tejido, las muestras pueden ser difíciles interpretar la mezcla dada de colores, como suceso a menudo porque la fluorescencia es de uso frecuente. Algunos tipos de ICH multicolor también traen el riesgo de autofluorescence por el tejido sí mismo, que hace la evaluación visual algo difícil.

Se ha sugerido que la microscopia de exploración confocal del laser puede ser utilizada, para cuantificar principal el presente de la fluorescencia. La microscopia espectral de esta clase puede descubrir los espectros de varios marcadores independientemente, que evita que se mezclen. Este procedimiento específico se ha aplicado al tejido de la amígdala, con cinco diversos colores.

Fuentes

Last Updated: Jan 3, 2019

Sara Ryding

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Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

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