Vista geral de rotulagem do ácido nucleico

Os ácidos nucleicos (isto é ADN e RNA) podem prontamente ser etiquetados com várias etiquetas que permitem suas detecção e/ou purificação. Estas etiquetas podem então ser usadas para recuperar ou identificar outras moléculas de interacção.

Câmaras de ar da pipeta e do eppendorf que contêm a amostra de ADN etiquetada com tintura cor-de-rosa.Crédito de imagem: anyaivanova/Shutterstock

Uma pletora de métodos químicos ou enzimáticos está disponível para gerar os ácidos nucleicos tais como aqueles etiquetados com fluorophores, enzimas e fosfatos radioactivos, ou nucleotides alterados com digoxygenin ou biotina.

Os métodos de Bioconjugation que são empregados gerando pontas de prova do ácido nucleico podem igualmente ser adaptados anexando ácidos nucleicos a algumas outras superfícies ou moléculas para ajudar à imobilização ou à entrega visada.

Escolher um método óptimo depende em parte do grau exigido de rotulagem e sobre se a alteração pode produzir as interacções desejadas.

Os métodos químicos e enzimáticos existem gerando isso são etiquetados no ′ 5 ou na extremidade de 3 ′ do oligonucleotide. Estes métodos podem igualmente ser usados para integrar pontas de prova durante todo a seqüência.

Quando a geração em escala reduzida da ponta de prova é necessário, os métodos enzimáticos apresentam uma aproximação econômica. Contudo, os métodos químicos são pertinentes para a produção da escala maior.

Métodos químicos para a rotulagem do ácido nucleico

Periodates é os aníons que são formados do oxigênio e do iodo, e é encontrado geralmente como sais do sódio ou do potássio. Os grupos do aldeído que são criados nas soluções com os periodates são espontâneamente reactivos para superfícies ou moléculas decontenção. Assim, a oxidação do periodate do RNA é um método químico comum para a rotulagem do ácido nucleico.

(3-dimethylaminopropyl) o carbodiimide EDC ou 1-Ethyl-3- é um composto solúvel em água que esteja usado preferivelmente em reacções aquosas quando o pH está entre 4,0 e 6,0. a conjugação EDC-negociada é uma aproximação econômica para o ADN e o RNA a toda a superfície decontenção preliminar ou a molécula de acoplamento.

A rotulagem química aleatória do ADN ou do RNA ao longo do comprimento de ácidos nucleicos é igualmente um método de rotulagem realizado que permita um grau mais alto de rotulagem quando comparado às técnicas derotulagem.

Contudo, uma desvantagem da rotulagem aleatória do produto químico é a alteração directa de bases do nucleotide, que reduz ou impede o emparelhamento das bases entre costas complementares quando as experiências da hibridação forem correntes. Daqui, equilibrar o grau de rotulagem com a eficiência da hibridação da ponta de prova em algumas experiências específicas é justificado definida.

Métodos enzimáticos para a rotulagem do ácido nucleico

A polimerase de ADN é uma enzima usada para criar polímeros do ADN por processos da extensão do alongamento ou da primeira demão do ADN.

Estas enzimas são usadas para gerar pontas de prova do ácido nucleico aleatòria incorporando nucleotides alterados durante a réplica do ADN, especialmente por procedimentos simples da extensão da primeira demão ou por reacções em cadeia da polimerase. Tais pontas de prova exibem a especificidade alta permitindo a detecção mesmo de quantidades minúsculas do alvo.

O transferase terminal do deoxynucleotidyl (abreviado geralmente como TdT) é uma enzima da polimerase de ADN que seja expressada em determinadas pilhas lymphoid. As fontes usuais de moldes do ADN que podem ser alterados com TdT incluem único-encalhado e de primeiras demão sem etiqueta da reacção em cadeia (PCR) da polimerase, assim como a limitação dobro-encalhada do endonuclease fragmentam com 3' saliências.

Uma enzima sabido como a ligase do RNA T4 (uma ligase ATP-dependente) essa hastes do bacteriófago T4 catalisa a ligação entre um ′ do terminal 5 - fosfate e um ′ do terminal 3 - grupo de hidróxilo na molécula do RNA.

Apesar da carcaça preliminar para esta ligase específica que é RNA, as condições da reacção podem ser aperfeiçoadas para moléculas do ADN (mais especificamente, moléculas único-encalhadas do ADN) também, com eficiência um tanto mais baixa.

A quinase de polinucleotido T4 (abreviada como T4 PNK), igualmente encontrada no bacteriófago T4, ajuda em transferência um fosfato orgânico da molécula do ATP ao ′ 5 - grupo de hidróxilo de um ácido nucleico. Esta enzima é molde independente e pode eficientemente alterar 5 saliências do ′ e polinucleotido único-encalhados.

Fontes

Further Reading

Last Updated: Feb 26, 2019

Dr. Tomislav Meštrović

Written by

Dr. Tomislav Meštrović

Dr. Tomislav Meštrović is a medical doctor (MD) with a Ph.D. in biomedical and health sciences, specialist in the field of clinical microbiology, and an Assistant Professor at Croatia's youngest university - University North. In addition to his interest in clinical, research and lecturing activities, his immense passion for medical writing and scientific communication goes back to his student days. He enjoys contributing back to the community. In his spare time, Tomislav is a movie buff and an avid traveler.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Meštrović, Tomislav. (2019, February 26). Vista geral de rotulagem do ácido nucleico. News-Medical. Retrieved on February 20, 2020 from https://www.news-medical.net/life-sciences/Nucleic-Acid-Labelling-Overview.aspx.

  • MLA

    Meštrović, Tomislav. "Vista geral de rotulagem do ácido nucleico". News-Medical. 20 February 2020. <https://www.news-medical.net/life-sciences/Nucleic-Acid-Labelling-Overview.aspx>.

  • Chicago

    Meštrović, Tomislav. "Vista geral de rotulagem do ácido nucleico". News-Medical. https://www.news-medical.net/life-sciences/Nucleic-Acid-Labelling-Overview.aspx. (accessed February 20, 2020).

  • Harvard

    Meštrović, Tomislav. 2019. Vista geral de rotulagem do ácido nucleico. News-Medical, viewed 20 February 2020, https://www.news-medical.net/life-sciences/Nucleic-Acid-Labelling-Overview.aspx.

Comments

The opinions expressed here are the views of the writer and do not necessarily reflect the views and opinions of News-Medical.Net.