Reseña de etiqueta del ácido nucléico

Los ácidos nucléicos (es decir DNA y ARN) se pueden etiqueta fácilmente con las diversas etiquetas que habilitan su detección y/o purificación. Estas escrituras de la etiqueta se pueden entonces utilizar para recuperar o para determinar otras moléculas que obran recíprocamente.

Tubos de la pipeta y del eppendorf que contienen la muestra de la DNA etiqueta con el tinte rosado.Haber de imagen: anyaivanova/Shutterstock

Una plétora de métodos químicos o enzimáticos está disponible para generar los ácidos nucléicos tales como ésos etiqueta con los fluorophores, las enzimas y los fosfatos radioactivos, o los nucleótidos modificados con el digoxygenin o la biotina.

Los métodos de Bioconjugation que se emplean para generar antenas del ácido nucléico se pueden también adaptar para sujetar los ácidos nucléicos a algunas otras superficies o moléculas para ayudar a la inmovilización o al lanzamiento apuntado.

Elegir un método óptimo depende en parte del grado requerido de etiqueta y conectado si la modificación puede producir las acciones recíprocas deseadas.

Los métodos químicos y enzimáticos existen para generar eso etiqueta en el ′ 5 o el extremo de 3 ′ del oligonucleótido. Estos métodos se pueden también utilizar para integrar antenas en la serie.

Cuando la generación a escala reducida de la antena es necesaria, los métodos enzimáticos presentan una aproximación económica. Sin embargo, los métodos químicos son pertinentes para la producción de una escala más grande.

Métodos químicos para la etiqueta del ácido nucléico

Periodates es los aniones que se forman del oxígeno y del yodo, y se encuentra común como sales del sodio o del potasio. Los grupos del aldehido que se crean en soluciones con los periodates son espontáneamente reactivos hacia superficies o moléculas amina-que contienen. Así, la oxidación del periodate del ARN es un método químico común para la etiqueta del ácido nucléico.

El carbodiimide EDC o 1-Ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) es una composición soluble en agua que se utiliza preferiblemente en reacciones acuosas cuando el pH está entre 4,0 y 6,0. la conjugación EDC-mediada es una aproximación económica para la DNA y el ARN a cualquier superficie amina-que contiene primaria o la molécula que acopla.

La etiqueta química al azar de la DNA o del ARN a lo largo del largo de ácidos nucléicos es también un método de etiqueta realizado que habilita un grado más alto de etiqueta cuando está comparado a las técnicas de fin-etiqueta.

Sin embargo, una desventaja de la etiqueta al azar de la substancia química es la modificación directa de las bases del nucleótido, que reduce o previene emparejar de bases entre los cabos complementarios mientras que los experimentos del hibridación están en curso. Por lo tanto, el equilibrio del grado de etiqueta con la eficiencia del hibridación de la antena en algunos experimentos específicos se autoriza definitivamente.

Métodos enzimáticos para la etiqueta del ácido nucléico

La polimerasa de DNA es una enzima usada para crear los polímeros de la DNA por procesos de la extensión de la elongación o de la pintura de fondo de la DNA.

Estas enzimas son utilizadas para generar antenas del ácido nucléico aleatoriamente incorporando los nucleótidos modificados durante la réplica de la DNA, especialmente por procedimientos simples de la extensión de la pintura de fondo o por reacciones en cadena de polimerasa. Tales antenas exhiben alta especificidad habilitando la detección incluso de las cantidades minuciosas del objetivo.

La transferasa terminal del deoxynucleotidyl (abreviada generalmente como TdT) es una enzima de la polimerasa de DNA que se expresa en ciertas células linfoides. Las fuentes usuales de los patrones de la DNA que se pueden modificar con TdT incluyen las pinturas de fondo de una sola fila y sin etiqueta de la reacción en cadena (PCR) de polimerasa, así como la restricción doble-trenzada del endonuclease hacen fragmentos con 3' las proyecciones.

Una enzima conocida como ligasa del ARN T4 (una ligasa ATP-relacionada) que proviene el bacteriófago T4 cataliza la vinculación entre un ′ de la terminal 5 - aplique capa de fosfato y un ′ de la terminal 3 - grupo de oxhidrilo en la molécula del ARN.

A pesar del substrato primario para esta ligasa específica que es ARN, las condiciones de la reacción se pueden optimizar para las moléculas de la DNA (más concretamente, moléculas de una sola fila de la DNA) también, con un rendimiento algo más bajo.

La cinasa de polinucleótido T4 (abreviada como T4 PNK), también encontrada en el bacteriófago T4, ayuda en la transferencia a un fosfato orgánico de la molécula del ATP al ′ 5 - grupo de oxhidrilo de un ácido nucléico. Esta enzima es independiente del patrón y puede modificar eficientemente 5 proyecciones del ′ y los polinucleótidos de una sola fila.

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Last Updated: Feb 26, 2019

Dr. Tomislav Meštrović

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Dr. Tomislav Meštrović

Dr. Tomislav Meštrović is a medical doctor (MD) with a Ph.D. in biomedical and health sciences, specialist in the field of clinical microbiology, and an Assistant Professor at Croatia's youngest university - University North. In addition to his interest in clinical, research and lecturing activities, his immense passion for medical writing and scientific communication goes back to his student days. He enjoys contributing back to the community. In his spare time, Tomislav is a movie buff and an avid traveler.

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