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Indicador do fago: Aplicações na pesquisa

O indicador do fago é uma técnica analítica usada para estudar interacções da proteína-proteína e o relacionamento entre uma proteína e o ADN de codificação.

Ilustração de um bacteriófago - o componente usado no indicador do fago - por Sebastian KaulitzkiSebastian Kaulitzki | Shutterstock

O indicador do fago começa incorporando a proteína do interesse na superfície externo do bacteriófago. Isto é feito emendando o segmento do ADN normal que codifica para a proteína na seqüência do ADN do bacteriófago que codifica para as proteínas do revestimento do fago.

Quando o bacteriófago contamina uma bactéria, submete-se a um processo de réplica, usando a maquinaria celular fornecida pela pilha bacteriana do anfitrião. A proteína do interesse deve ser produzida durante este processo, e assim, toda a descendência mais adicional produzirá esta proteína em cima da infecção bacteriana.

Determinados bacteriófagos são de uso geral para o indicador do fago, incluindo M13, lambda, e T7. Todos os três contaminam o Escherichia Coli, um organismo modelo prokaryotic extensamente estudado que possa facilmente ser crescido em condições do laboratório. Isto permite a proliferação e o estudo fáceis destes bacteriófagos diferentes.

Selecção da afinidade

O grande indicador “bibliotecas” do fago foi criado, que consistem em uma mistura maciça de variação dos bacteriófagos que indicam proteínas estrangeiras diferentes alterando a seqüência viral do ADN.  Estas bibliotecas podem ser usadas para seleccionar para as proteínas que ligam a determinados receptors.

Uma técnica de uso geral na purificação da proteína é cromatografia de afinidade. Esta técnica pode ser usada na coordenação com indicador do fago fixando os receptors específicos do interesse em uma coluna e em um corredor uma biblioteca do fago através desta coluna.

O bacteriófago com uma proteína de superfície que tenha a afinidade para estes receptors é retido e pode então ser refinado e crescido em uma cultura de pilhas de Escherichia Coli. Esta técnica da selecção pode ser usada para determinar a função de uma proteína desconhecida identificando as proteínas que interaja com.

Projecto da droga

As proteínas que ligam aos receptors podem actuar como stimulators ou inibidores potenciais dos caminhos que o receptor regula normalmente. A maioria de doenças podem ser relacionadas aos vários caminhos metabólicos no corpo que têm as proteínas associadas com elas.

A purificação das proteínas da biblioteca do indicador do fago pode desenvolver drogas novas potenciais. O local activo de uma proteína pode ser transformado em várias maneiras, e a proteína pode ser seleccionada usando a selecção da afinidade do indicador do fago. Isto permite a medida da força da carcaça que liga no contexto da mutação.

As seqüências de ácido aminado que são envolvidas no emperramento podem obtido então olhando o ADN viral no bacteriófago específico. Alterando o local activo e melhorando o emperramento a um inibidor, pode aumentar a eficácia do inibidor e de um projecto mais adicional da droga.

Indicador do fago na imunologia

As vacinas novas têm disponível tornado devido às técnicas do indicador do fago. Usando a selecção da afinidade e anticorpos específicos como o receptor, os antígenos que imitam os antígenos de determinados micróbios patogénicos podem ser refinados. A introdução dos fago com estes antígenos no indicador no corpo pode potencial actuar como uma vacina sem introduzir o micróbio patogénico no corpo.

Há igualmente uns usos potenciais para o indicador do fago no diagnóstico da doença. Usando anticorpos de um paciente à afinidade seleccione para antígenos obrigatórios, os antígenos doença-específicos pode ser descoberto que podem mostrar a presença de uma doença.

Fontes

Further Reading

Last Updated: Jan 7, 2019

Written by

Jack Davis

Jack is a freelance scientific writer with research experience in molecular biology, genetics, human anatomy and physiology, and advanced analytical chemistry. He is also highly knowledgeable about DNA technology, drug analysis, human disease, and biotechnology.

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