Purification de la protéine A/G pour des anticorps

La méthode de purification de la protéine A/G est employée pour purifier les anticorps monoclonaux d'IgA et d'IgG utilisant un recombiné de la protéine A et de la protéine G - également connue sous le nom de protéine A/G.

Illustration dJuan Gaertner | Shutterstock

Purification d'affinité des anticorps

Des méthodes précédentes de purification, telles que la précipitation de sulfate d'ammonium, ont été connues pour fournir une purification brute des protéines. La purification d'affinité des anticorps est l'une de techniques très utilisées où un ligand est accouplé à un gel réticulé d'agarose utilisant les liaisons covalentes.

Les liquides témoin sont alors permis de réussir par le matériau et les immunoglobulines grippent aux ligands. Les composantes liées par non sont alors enlevées et alors les tampons spécifiques de lavage sont employés pour dissocier les immunoglobulines qui sont fixées au ligand immobilisé.

Ceux-ci sont alors récupérés en forme pure pour produire des anticorps purifiés. Les tampons de grippement et d'élution font une part importante dans le procédé de purification, alors que les différents facteurs (tels que la concentration ionique, le pH et la température) peuvent affecter le rendement du procédé.

Protéine A

La protéine A est une composante de la paroi cellulaire qui est produite par différentes tensions de staphylocoque doré bactérien de substance. Elle ne contient pas l'hydrate de carbone et a un réseau unique de polypeptide. Cette protéine peut gripper à la région de Fc de l'immunoglobuline d'IgG, et elle a quatre sites qui peuvent gripper avec l'affinité élevée à l'IgG.

En outre, cette molécule est hautement stable vers des agents de la chaleur et de dénaturant - comprenant le chlorhydrate d'urée, de sulfocyanate et de guanidine. Bien qu'elle soit employée pour isoler l'IgG, le rendement obligatoire de la protéine A à IgG n'est pas assimilé dans différents animaux et sous-classes d'IgG. Plus particulièrement, le grippage IgG1, IgG2, et IgG4 humain à la protéine A, alors que l'IgG3 grippe seulement faible.

De même, les différentes classes de l'IgG grippent seulement faible ou ne collent pas sur la protéine A. Cependant, indépendamment de ces limitations, la protéine A représente toujours une des méthodes efficaces pour épurer l'IgG de différentes sources. En outre, les variabilités dans le grippement de la protéine A à différentes classes d'IgG peuvent être employées pour séparer les différents types entre eux.

Protéine G

La protéine G est une composante de la paroi cellulaire qui a été isolée dans des streptocoques du groupe G. Elle a une masse de 22-34 kilodaltons (kDa).

La protéine G grippe également à l'immunoglobuline par la région de Fc, et grippe seulement faible à l'éclat ouvrier d'un anticorps. Indépendamment des accepteurs d'immunoglobuline, la protéine G contient également des sites pour gripper la surface d'albumine et de cellules. Ces sites sont retirés pour augmenter la spécificité obligatoire et pour réduire la liaison non spécifique de la protéine G.

Cette protéine est employée pour épurer les protéines qui ne grippent pas à la protéine A, et les études prouvent que la plupart des immunoglobulines mammifères ont une affinité plus grande pour la protéine G si comparées à la protéine A. En outre, la protéine G ne grippe pas à l'IgM, à l'IgA, et à l'IgD humains, contrairement à la protéine A.

Protéine A/G

La protéine A/G représente une protéine génétiquement conçue pour combiner les propriétés de la protéine A et de la protéine G. Ceci est fondamentalement fait pour développer une protéine plus efficace qui pourrait avoir des profils obligatoires les des deux les protéines. Ce produit de fusion de génique est sécrété d'une forme du bacille substance qui est non pathogène.

La protéine A/G se compose de quatre domaines qui grippent à la région de Fc de la protéine A, et de deux domaines qui grippent à la protéine G. En outre, cette protéine de fusion ne dépend pas du pH (la protéine différente A) et a les propriétés de liage additives des deux protéines.

À la différence de la protéine A ou de la protéine G qui grippent aux sous-classes spécifiques de l'IgG humain, la protéine A/G peut gripper à toutes les classes des anticorps humains. En cas de souris IgG, cette protéine peut gripper à tous les types - excepté l'IgA, l'IgM, et l'albumine sérique.

Toutes les propriétés mentionnées ci-dessus effectuent à la protéine A/G une méthode efficace pour localiser la souris IgG sans croix-gripper dans l'IgA, l'IgM, ou les albumines sériques. En outre, les anticorps monoclonaux ont été montrés pour gripper plus fortement et efficacement à cette protéine de fusion, par rapport à la protéine A ou à la protéine G.

Last Updated: Jan 9, 2019

Dr. Surat P

Written by

Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    P, Surat. (2019, January 09). Purification de la protéine A/G pour des anticorps. News-Medical. Retrieved on February 18, 2020 from https://www.news-medical.net/life-sciences/Protein-AG-Purification-for-Antibodies.aspx.

  • MLA

    P, Surat. "Purification de la protéine A/G pour des anticorps". News-Medical. 18 February 2020. <https://www.news-medical.net/life-sciences/Protein-AG-Purification-for-Antibodies.aspx>.

  • Chicago

    P, Surat. "Purification de la protéine A/G pour des anticorps". News-Medical. https://www.news-medical.net/life-sciences/Protein-AG-Purification-for-Antibodies.aspx. (accessed February 18, 2020).

  • Harvard

    P, Surat. 2019. Purification de la protéine A/G pour des anticorps. News-Medical, viewed 18 February 2020, https://www.news-medical.net/life-sciences/Protein-AG-Purification-for-Antibodies.aspx.

Comments

The opinions expressed here are the views of the writer and do not necessarily reflect the views and opinions of News-Medical.Net.