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Depurazione della proteina A/G per gli anticorpi

Il metodo di depurazione della proteina A/G è usato per depurare gli anticorpi monoclonali di IgG e di IgA facendo uso di un recombinante di proteina A e di proteina G - anche conosciuta come proteina A/G.

Illustrazione di un anticorpoJuan Gaertner | Shutterstock

Depurazione di affinità degli anticorpi

I metodi precedenti di depurazione, quale la precipitazione del solfato di ammonio, sono stati conosciuti per rendere una depurazione grezza delle proteine. La depurazione di affinità degli anticorpi è una delle tecniche ampiamente usate dove un legante è accoppiato ad un gel di agarosio unito con legami atomici incrociati facendo uso delle obbligazioni covalenti.

I liquidi del campione poi sono permessi passare attraverso il materiale e le immunoglobuline legano ai leganti. Alle le componenti dirette non poi sono lavate via e poi i buffer specifici del lavaggio sono utilizzati per dissociare le immunoglobuline che sono fissate al legante vincolato.

Questi poi sono recuperati nel modulo puro per generare gli anticorpi depurativi. I buffer dell'eluizione e dell'associazione fanno parte una parte importante nel trattamento di depurazione, mentre i fattori differenti (quali forza ionica, pH e la temperatura) possono pregiudicare il risparmio di temi del trattamento.

Proteina A

La proteina A è una componente della parete cellulare che è prodotta dagli sforzi differenti dello staphylococcus aureus batterico di specie. Non contiene il carboidrato ed ha una singola catena del polipeptide. Questa proteina può legare alla regione di Fc di immunoglobulina di IgG ed ha quattro siti che possono legare con alta affinità a IgG.

Ancora, questa molecola è altamente stabile verso il calore ed agenti denaturare - compreso il cloridrato dell'urea, del tiocianato e della guanidina. Sebbene sia usata per isolare IgG, il risparmio di temi obbligatorio di proteina A a IgG non è simile in animali ed in sottoclassi differenti di IgG. Più specificamente, la legatura umana IgG1, IgG2 e IgG4 a proteina A, mentre il IgG3 lega soltanto debolmente.

Similmente, le classi differenti di IgG legano soltanto debolmente o non saldano a proteina A. Tuttavia, indipendentemente da queste limitazioni, la proteina A ancora rappresenta uno dei metodi potenti per depurare IgG dalle sorgenti differenti. Inoltre, le variabilità in associazione della proteina A alle classi differenti di IgG possono essere usate per separare i tipi differenti l'uno dall'altro.

Proteina G

La proteina G è una componente della parete cellulare che è stata isolata dagli streptococchi di G del gruppo. Ha la massa di 22-34 kilodaltons (kDa).

La proteina G egualmente lega all'immunoglobulina con la regione di Fc e soltanto lega debolmente al frammento favoloso di un anticorpo. Oltre alle sedi del legame dell'immunoglobulina, la proteina G egualmente contiene i siti per legare la superficie delle cellule e dell'albumina. Questi siti sono eliminati per aumentare la specificità obbligatoria e per diminuire l'associazione non specifica della proteina G.

Questa proteina è usata per depurare le proteine che non legano a proteina A e gli studi indicano che la maggior parte delle immunoglobuline mammifere hanno una maggior affinità per proteina G una volta confrontate a proteina A. Inoltre, la proteina G non lega all'essere umano IgM, IgA e IgD, contrariamente a proteina A.

Proteina A/G

La proteina A/G rappresenta una proteina geneticamente costruita per combinare i beni sia di proteina A che di proteina G. Ciò è fatta basicamente per sviluppare una proteina più potente che potrebbe avere profili obbligatori delle entrambe proteine. Questo prodotto di fusione del gene è secernuto da un modulo del bacillo specie che è non patogeno.

La proteina A/G consiste di quattro domini che legano alla regione di Fc di proteina A e di due domini che legano a proteina G. Inoltre, questa proteina di fusione non dipende da pH (da proteina dissimile A) ed ha i beni obbligatori additivi di entrambe le proteine.

A differenza di proteina A o di proteina G che legano alle sottoclassi specifiche dell'essere umano IgG, la proteina A/G può legare a tutte le classi di anticorpi umani. Nel caso del mouse IgG, questa proteina può legare a tutte le classi - eccetto IgA, IgM e albumina.

Tutti i beni suddetti rendono a proteina A/G un metodo potente per isolare il mouse IgG senza inter-associazione a IgA, a IgM, o ad albumine. Inoltre, gli anticorpi monoclonali sono stati indicati per legare più forte ed efficientemente a questa proteina di fusione, rispetto a proteina A o a proteina G.

Sorgenti

[ulteriore lettura: anticorpo]

Last Updated: Jan 9, 2019

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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