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Purificação da proteína A/G para anticorpos

O método da purificação da proteína A/G é usado para refinar anticorpos monoclonais de IgA e de IgG usando um de recombinação da proteína A e da proteína G - igualmente conhecida como a proteína A/G.

Ilustração de um anticorpoJuan Gaertner | Shutterstock

Purificação da afinidade dos anticorpos

Os métodos precedentes da purificação, tais como a precipitação do sulfato do amónio, foram sabidos para render uma purificação bruta das proteínas. A purificação da afinidade dos anticorpos é uma das técnicas amplamente utilizadas onde uma ligante é acoplada a um gel ligado do agarose usando ligações covalent.

Os líquidos da amostra são permitidos então passar através do material e as imunoglobulina ligam às ligantes. Os componentes do não-limite são lavados então afastado e os amortecedores específicos da lavagem são usados então para separar as imunoglobulina que são anexadas à ligante imobilizada.

Estes são recuperados então no formulário puro para gerar anticorpos refinados. Os amortecedores do emperramento e da eluição fazem uma parte importante no processo da purificação, quando os factores diferentes (tais como a concentração iónica, o pH e a temperatura) puderem afectar a eficiência do processo.

Proteína A

A proteína A é um componente da parede de pilha que é produzida por tensões diferentes do estafilococo bacteriano da espécie - áureo. Não contem o hidrato de carbono e tem uma única corrente do polipeptídeo. Esta proteína pode ligar à região de Fc de imunoglobulina de IgG, e tem quatro locais que podem ligar com afinidade alta a IgG.

Além disso, esta molécula é altamente estável para o calor e agentes da desnaturalização - incluir o hidrocloro da uréia, do thiocyanate e do guanidine. Embora seja usada para isolar IgG, a eficiência obrigatória da proteína A a IgG não é similar em animais e em subclasses diferentes de IgG. Mais especificamente, o ligamento IgG1, IgG2, e IgG4 humano à proteína A, quando o IgG3 ligar somente fraca.

Similarmente, as classes diferentes de IgG ligam somente fraca ou não se ligam à proteína A. Contudo, apesar destas limitações, a proteína A ainda representa um dos métodos poderosos para refinar IgG das fontes diferentes. Também, as variabilidades no emperramento da proteína A às classes diferentes de IgG podem ser usadas para separar os tipos diferentes de se.

Proteína G

A proteína G é um componente da parede de pilha que foi isolada dos estreptococos de G do grupo. Tem uma massa de 22-34 kilodaltons (kDa).

A proteína G igualmente liga à imunoglobulina com a região de Fc, e liga somente fraca ao fragmento fabuloso de um anticorpo. Independentemente dos locais obrigatórios da imunoglobulina, a proteína G igualmente contem locais para ligar a superfície da albumina e da pilha. Estes locais são removidos para aumentar a especificidade obrigatória e para reduzir o emperramento não específico da proteína G.

Esta proteína é usada para refinar as proteínas que não ligam à proteína A, e os estudos mostram que a maioria de imunoglobulina mamíferas têm uma afinidade maior para a proteína G quando comparadas à proteína A. Também, a proteína G não liga ao ser humano IgM, IgA, e IgD, em contraste com a proteína A.

Proteína A/G

A proteína A/G representa uma proteína genetically projetada para combinar as propriedades da proteína A e da proteína G. Isto é feito basicamente para desenvolver uma proteína mais poderoso que poderia ter perfis obrigatórios de ambas as proteínas. Este produto da fusão do gene é segregado de um formulário do bacilo espécie que é não-patogénico.

A proteína A/G consiste em quatro domínios que ligam à região de Fc da proteína A, e em dois domínios que ligam à proteína G. Também, esta proteína da fusão não é dependente do pH (a proteína desigual A) e tem as propriedades obrigatórias aditivas de ambas as proteínas.

Ao contrário da proteína A ou da proteína G que ligam às secundário-classes específicas de ser humano IgG, a proteína A/G pode ligar a todas as classes de anticorpos humanos. Em caso do rato IgG, esta proteína pode ligar a todas as classes - exceto IgA, IgM, e albumina de soro.

Todas as propriedades acima mencionadas fazem à proteína A/G um método poderoso para isolar o rato IgG sem cruz-ligar a IgA, a IgM, ou a albuminas de soro. Também, os anticorpos monoclonais foram mostrados para ligar mais fortemente e eficientemente a esta proteína da fusão, em comparação com a proteína A ou a proteína G.

Fontes

[leitura adicional: anticorpo]

Last Updated: Jan 9, 2019

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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