O método da purificação da proteína A/G é usado para refinar anticorpos monoclonais de IgA e de IgG usando um de recombinação da proteína A e da proteína G - igualmente conhecida como a proteína A/G.
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Purificação da afinidade dos anticorpos
Os métodos precedentes da purificação, tais como a precipitação do sulfato do amónio, foram sabidos para render uma purificação bruta das proteínas. A purificação da afinidade dos anticorpos é uma das técnicas amplamente utilizadas onde uma ligante é acoplada a um gel ligado do agarose usando ligações covalent.
Os líquidos da amostra são permitidos então passar através do material e as imunoglobulina ligam às ligantes. Os componentes do não-limite são lavados então afastado e os amortecedores específicos da lavagem são usados então para separar as imunoglobulina que são anexadas à ligante imobilizada.
Estes são recuperados então no formulário puro para gerar anticorpos refinados. Os amortecedores do emperramento e da eluição fazem uma parte importante no processo da purificação, quando os factores diferentes (tais como a concentração iónica, o pH e a temperatura) puderem afectar a eficiência do processo.
Proteína A
A proteína A é um componente da parede de pilha que é produzida por tensões diferentes do estafilococo bacteriano da espécie - áureo. Não contem o hidrato de carbono e tem uma única corrente do polipeptídeo. Esta proteína pode ligar à região de Fc de imunoglobulina de IgG, e tem quatro locais que podem ligar com afinidade alta a IgG.
Além disso, esta molécula é altamente estável para o calor e agentes da desnaturalização - incluir o hidrocloro da uréia, do thiocyanate e do guanidine. Embora seja usada para isolar IgG, a eficiência obrigatória da proteína A a IgG não é similar em animais e em subclasses diferentes de IgG. Mais especificamente, o ligamento IgG1, IgG2, e IgG4 humano à proteína A, quando o IgG3 ligar somente fraca.
Similarmente, as classes diferentes de IgG ligam somente fraca ou não se ligam à proteína A. Contudo, apesar destas limitações, a proteína A ainda representa um dos métodos poderosos para refinar IgG das fontes diferentes. Também, as variabilidades no emperramento da proteína A às classes diferentes de IgG podem ser usadas para separar os tipos diferentes de se.
Proteína G
A proteína G é um componente da parede de pilha que foi isolada dos estreptococos de G do grupo. Tem uma massa de 22-34 kilodaltons (kDa).
A proteína G igualmente liga à imunoglobulina com a região de Fc, e liga somente fraca ao fragmento fabuloso de um anticorpo. Independentemente dos locais obrigatórios da imunoglobulina, a proteína G igualmente contem locais para ligar a superfície da albumina e da pilha. Estes locais são removidos para aumentar a especificidade obrigatória e para reduzir o emperramento não específico da proteína G.
Esta proteína é usada para refinar as proteínas que não ligam à proteína A, e os estudos mostram que a maioria de imunoglobulina mamíferas têm uma afinidade maior para a proteína G quando comparadas à proteína A. Também, a proteína G não liga ao ser humano IgM, IgA, e IgD, em contraste com a proteína A.
Proteína A/G
A proteína A/G representa uma proteína genetically projetada para combinar as propriedades da proteína A e da proteína G. Isto é feito basicamente para desenvolver uma proteína mais poderoso que poderia ter perfis obrigatórios de ambas as proteínas. Este produto da fusão do gene é segregado de um formulário do bacilo espécie que é não-patogénico.
A proteína A/G consiste em quatro domínios que ligam à região de Fc da proteína A, e em dois domínios que ligam à proteína G. Também, esta proteína da fusão não é dependente do pH (a proteína desigual A) e tem as propriedades obrigatórias aditivas de ambas as proteínas.
Ao contrário da proteína A ou da proteína G que ligam às secundário-classes específicas de ser humano IgG, a proteína A/G pode ligar a todas as classes de anticorpos humanos. Em caso do rato IgG, esta proteína pode ligar a todas as classes - exceto IgA, IgM, e albumina de soro.
Todas as propriedades acima mencionadas fazem à proteína A/G um método poderoso para isolar o rato IgG sem cruz-ligar a IgA, a IgM, ou a albuminas de soro. Também, os anticorpos monoclonais foram mostrados para ligar mais fortemente e eficientemente a esta proteína da fusão, em comparação com a proteína A ou a proteína G.
Fontes
[leitura adicional: anticorpo]