Purificación de la proteína A/G para los anticuerpos

El método de la purificación de la proteína A/G se utiliza para purificar los anticuerpos monoclonales de IgA y de IgG usando un recombinante de la proteína A y de la proteína G - también conocida como proteína A/G.

Ejemplo de un anticuerpoJuan Gaertner | Shutterstock

Purificación de la afinidad de anticuerpos

Los métodos anteriores de la purificación, tales como precipitación del sulfato del amonio, eran sabidos para rendir una purificación cruda de proteínas. La purificación de la afinidad de anticuerpos es una de las técnicas ampliamente utilizadas donde un ligand se acopla a un gel reticulado de la agarosa usando ligazones covalentes.

Los líquidos de la muestra entonces se permiten pasar a través del material y las inmunoglobulinas atan a los ligands. Entonces se quitan los componentes del no-salto y entonces los almacenadores intermedios específicos de la estela turbulenta se utilizan para disociar las inmunoglobulinas que se sujetan al ligand inmovilizado.

Éstos entonces se recuperan en forma pura para generar los anticuerpos purificados. Los almacenadores intermedios del atascamiento y de la elución crean a una parte importante en el proceso de la purificación, mientras que diversos factores (tales como fuerza iónica, pH y temperatura) pueden afectar a la eficiencia del proceso.

Proteína A

La proteína A es un componente de la pared celular que es producida por diversas deformaciones del estafilococo áureo bacteriano de la especie. No contiene el hidrato de carbono y tiene una única cadena del polipéptido. Esta proteína puede atar a la región de Fc de inmunoglobulina de IgG, y tiene cuatro sitios que puedan atar con alta afinidad a IgG.

Además, esta molécula es altamente estable hacia calor y los agentes de la desnaturalización - incluyendo el clorhidrato de la urea, del tiocianato y de la guanidina. Aunque se utilice para aislar IgG, la eficiencia obligatoria de la proteína A a IgG no es similar en diversos animales y subclases de IgG. Más concretamente, el lazo humano IgG1, IgG2, e IgG4 a la proteína A, mientras que el IgG3 ata solamente débil.

Semejantemente, diversas clases de IgG atan solamente débil o no pegan a la proteína A. Sin embargo, sin importar estas limitaciones, la proteína A todavía representa uno de los métodos potentes para purificar IgG de diferentes fuentes. También, las variabilidades en el atascamiento de la proteína A a diversas clases de IgG se pueden utilizar para separar los diversos tipos de uno a.

Proteína G

La proteína G es un componente de la pared celular que se ha aislado de estreptococos de G del grupo. Tiene una masa de 22-34 kilodaltons (kDa).

La proteína G también ata a la inmunoglobulina con la región de Fc, y ata solamente débil al fragmento fabuloso de un anticuerpo. Aparte de puntos de enlace de la inmunoglobulina, la proteína G también contiene sitios para atar la superficie de la albúmina y de la célula. Estos sitios se quitan para aumentar la especificidad obligatoria y para reducir el atascamiento no específico de la proteína G.

Esta proteína se utiliza para purificar las proteínas que no atan a la proteína A, y los estudios muestran que la mayoría de las inmunoglobulinas mamíferas tienen una mayor afinidad para la proteína G cuando están comparadas a la proteína A. También, la proteína G no ata al ser humano IgM, IgA, e IgD, en contraste con la proteína A.

Proteína A/G

La proteína A/G representa una proteína genético dirigida para combinar las propiedades de la proteína A y de la proteína G. Esto se hace básicamente para desarrollar una proteína más potente que podría tener perfiles obligatorios ambas las proteínas. Este producto de la fusión del gen se secreta de una forma del bacilo especie que es no patógeno.

La proteína A/G consiste en cuatro dominios que aten a la región de Fc de la proteína A, y dos dominios que aten a la proteína G. También, esta proteína de la fusión no es relacionada en el pH (la proteína desemejante A) y tiene las propiedades obligatorias aditivas de ambas proteínas.

A diferencia de la proteína A o de la proteína G que atan a las subclases específicas del ser humano IgG, la proteína A/G puede atar a todas las clases de anticuerpos humanos. En caso del ratón IgG, esta proteína puede atar a todas las clases - excepto IgA, IgM, y la albúmina de suero.

Todas las propiedades ya mencionadas hacen la proteína A/G un método potente para aislar el ratón IgG sin cruz-atar a IgA, a IgM, o a las albúminas de suero. También, los anticuerpos monoclonales se han mostrado para atar más fuertemente y eficientemente a esta proteína de la fusión, con respecto a la proteína A o a la proteína G.

Fuentes

[lectura adicional: anticuerpo]

Last Updated: Jan 9, 2019

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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