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Analyse de composé de protéine

Les protéines, aussi polypeptides appelés, sont les polymères des acides aminés. Il y a un total de vingt monomères appelés d'acides aminés qui existent naturellement en protéines. Des protéines sont trouvées en abondance et sont différenciées entre eux selon le nombre, le type, et l'agencement d'acides aminés en série, qui comportent le soutien principal des polypeptides.

Crédit : PolakPhoto/Shutterstock.com

Pour différentes raisons, les protéines sont les composantes principales de la nourriture, ainsi qu'une source importante pour produire l'énergie. Les protéines sont généralement présentes dans beaucoup de types d'aliment naturel tels que les poissons ou la viande. Plusieurs des protéines en nourriture sont des enzymes qui peuvent améliorer un certain nombre de réactions biochimiques. La présence des acides aminés en protéines est très essentielle pour la santé des personnes.

Méthodes impliquées en analysant la protéine

Les différentes protéines ont différentes structures moléculaires, propriétés physiochimiques, et attributs nutritionnels. Trois opérations importantes sont impliquées dans l'analyse de protéine.

1. Séparation de protéine

Ce qui suit sont certaines des méthodes classiques pour séparer des protéines :

  • SDS (sulfate dodécylique de sodium) - PAGE : La séparation de protéine par cette méthode est basée sur le poids moléculaire, par opposition au pli ou à la charge. Les facteurs autres que le poids moléculaire, cependant, peuvent également affecter le mouvement des protéines sur le gel de SDS, qui s'est analysé dans un groupe de cours. Cette technique est grand employée dans la génétique, les biochimies, la biologie moléculaire, et les médecines légales.
  • Mise au point isoélectrique : La séparation de la protéine dépend par cette méthode du reste entre les acides aminés constitutifs (fondamentaux) chargés (acide) et par positif chargés de négatif, qui définit une remarque isoélectrique de protéine appelée (PI) de propriété. La charge nette des protéines dans le pH devient exactement zéro. Protéines qui varient par aussi petit qu'un résidu chargé unique peut être isolé par cette méthode.

D'autre part, cependant, des protéines de différentes tailles avec une valeur assimilée de pi peuvent être mises au même lieu. Souvent, deux méthodes chromatiques sont employées pour la séparation des protéines ou même pour la séparation de peptide.

  • Des méthodes (HPLC) de chromatographie liquide haute performance sont employées pour séparer et épurer des peptides ou des protéines sur la base de la charge, taille, ou sur le hydrophobicity entier.
  • La chromatographie en couche mince (TLC) a été également employée pour séparer des peptides sur la base de leurs propriétés assimilées.
  • Électrophorèse en gel par des deux-cotes (2D) : C'est une technique puissante généralement utilisée pour analyser les échantillons complexes, mais il ne peut être employé pour des quelques ou les protéines spécifiques, dans l'intérêt de caractériser toutes les variétés d'échantillons de protéine. Dans cette méthode, d'abord la protéine est réussie dans un circuit étroit de gel de désignation d'objectifs isoélectrique. Basé sur la remarque isoélectrique la protéine peut être séparée.

Alors le gel de désignation d'objectifs isoélectrique est situé au-dessus du gel de SDS-PAGE et il est fait fonctionner dans le sens perpendiculaire. Des protéines faites fonctionner comme endroits et leur position est basées sur leur taille et propriétés chargées. Ceci fournit une séparation puissante des protéines utilisant l'un ou l'autre de ces deux gels seulement, qui sont mise au point isoélectrique ou SDS-PAGE.

2. Western blotting

L'immunoempreinte est considérée la version la plus générale d'éponger occidental et est employée en combination avec des méthodes chromatographiques. Cette méthode est employée pour recenser les protéines spécifiques dans une pièce donnée d'extrait tissulaire ou d'homogénat. L'échantillon de protéine electrophoresed d'abord à l'aide de la page de SDS pour la séparation des protéines sur la base du poids moléculaire.

Après ceci, le gel mouillé est positionné contre la feuille de nitrocellulose et maintenu dans un type particulier de chambre électrophorétique. Ensuite, un champ électrique est réussi dans le gel qui fait déménager la protéine hors du gel et également sur la feuille de nitrocellulose en laquelle il devient adsorbé fortement. Après, la feuille de nitrocellulose avec ceci protéine fortement liée peut « être sondée » ou « être épongée » avec des anticorps, particulièrement pour viser la protéine.

3. Identification des protéines

Si l'endroit ou la bande de protéine était trouvé sur un gel, la prochaine opération est de déterminer leur identité moléculaire. Les deux méthodes couramment procurables pour cette méthode sont comme suit.

  • Dégradation d'Edman : Cette méthode a été développée par Pehr Edman. Il avait l'habitude les isothiocyanates appelés de réactifs pour agir et réagir avec les N-terminus du peptide ou de la protéine. Dans certaines conditions adaptées, un « rond » solitaire de la dégradation d'Edman peut diviser le résidu aminé de terminus pour produire le dérivé acide aminé en plus d'un N-terminus libre neuf. Éventuellement, le terminus aminé est séparé de la protéine, sans interrompre l'adhérence des protéines entre les autres acides aminés résiduels.
  • Spectrométrie de masse : C'est la méthode la plus convenable pour recenser le poids moléculaire exact de protéine. Puisque cette méthode est très sensible et favorable au traitement rapide de plusieurs échantillons, cette technique est devenue populaire pour recenser les différents genres de protéines qui sont présentes dans un échantillon complexe. Par conséquent, la spectrométrie de masse peut être employée pour la détermination de la séquence des protéines et ainsi de l'identité de protéine d'une voie conceptuellement comme ci-dessus décrite, basées sur une dégradation d'Edman.

Observé par BSC d'Afsaneh Khetrapal (chéris)

Last Updated: May 24, 2019

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