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Análise do complexo da proteína

As proteínas, igualmente chamadas polipeptídeos, são os polímeros dos ácidos aminados. Há um total de vinte ácidos aminados chamados os monómeros que existem naturalmente nas proteínas. As proteínas são encontradas em abundância e diferenciadas de se de acordo com o número, o tipo, e o regime dos ácidos aminados em série, que compreendem o essencial dos polipeptídeos.

Crédito: PolakPhoto/Shutterstock.com

Por diferentes razões, as proteínas são os componentes principais do alimento, assim como uma fonte importante para produzir a energia. As proteínas estão geralmente actuais em muitos tipos naturais do alimento tais como peixes ou carne. Muitas das proteínas no alimento são as enzimas que podem melhorar um determinado número de reacções bioquímicas. A presença de ácidos aminados nas proteínas é muito essencial para a saúde humana.

Métodos envolvidos em analisar a proteína

As proteínas diferentes têm estruturas moleculars diferentes, propriedades physiochemical, e atributos nutritivos. Três etapas principais são envolvidas na análise da proteína.

1. Separação da proteína

Os seguintes são alguns dos métodos comuns para separar proteínas:

  • SDS (sulfato dodecyl de sódio) - PÁGINA: A separação da proteína é baseada através deste método no peso molecular, ao contrário da dobra ou da carga. Os factores diferentes do peso molecular, contudo, podem igualmente afectar o movimento das proteínas no gel do SDS, que foi analisado em um grupo do curso. Esta técnica é usada amplamente na genética, na bioquímica, na biologia molecular, e no forense.
  • Focagem isoeléctrica: A separação de proteína é através deste método dependente do balanço entre os ácidos aminados constitutivos (básicos) cobrados (ácido) e positivo cobrados do negativo, que define uma propriedade chamada ponto isoeléctrico (PI) da proteína. A carga líquida das proteínas no pH torna-se exactamente zero. Proteínas que variam perto tão pequeno como um único resíduo cobrado pode ser isolado através deste método.

Por outro lado, contudo, as proteínas de tamanhos diferentes com um valor similar do PI podem ser colocadas no mesmo lugar. Frequentemente, dois métodos cromáticos são usados para a separação de proteínas ou mesmo para a separação do peptide.

  • Os métodos de capacidade elevada da cromatografia (HPLC) líquida são usados separando e refinando peptides ou proteínas com base na carga, no tamanho, ou em geral no hydrophobicity.
  • a cromatografia da Fino-camada (TLC) foi usada igualmente separando peptides com base em suas propriedades similares.
  • Electroforese do gel com as dois-dimensões (2D): Esta é uma técnica poderosa usada geralmente analisando amostras complexas, mas não pode ser usado para alguns ou proteínas específicas, no interesse de caracterizar todas as variedades de amostras da proteína. Neste método, a proteína é passada primeiramente em um trajecto estreito do gel de escolha de objectivos isoeléctrico. Baseado no ponto isoeléctrico a proteína pode ser separada.

O gel de escolha de objectivos isoeléctrico é situado então sobre o gel de SDS-PAGE e é executado no sentido perpendicular. As proteínas executadas como pontos e sua posição são baseadas em seus tamanho e propriedades cobradas. Isto fornece uma separação poderosa de proteínas usando qualquer um destes dois geles somente, que são focagem isoeléctrica ou SDS-PAGE.

2. Mancha ocidental

Immunoblotting é considerado a versão a mais geral da mancha ocidental e usado em combinação com métodos cromatográficos. Este método é usado identificando proteínas específicas dentro de uma parte dada de extracto de tecido ou de homogenate. A amostra da proteína electrophoresed primeiramente usando a página do SDS para a separação de proteínas com base no peso molecular.

Depois disto, o gel molhado é posicionado contra a folha da nitrocelulose e mantido em um tipo especial da câmara electrophoretic. Depois disso, um campo elétrico é passado no gel que faz com que a proteína se mova fora do gel e igualmente na folha da nitrocelulose em que se torna fixado firmemente. Mais tarde, a folha da nitrocelulose com esta proteína firmemente limitada pode “ser sondada” ou “ser borrada” com anticorpos, especificamente para visar a proteína.

3. Identificação da proteína

Se o ponto ou a faixa da proteína foram encontrados em um gel, o passo seguinte é determinar sua identidade molecular. Os dois métodos geralmente disponíveis para este método são como segue.

  • Degradação de Edman: Este método foi desenvolvido por Pehr Edman. Usou os reagentes chamados isothiocyanates para actuar e reagir com o N-término do peptide ou da proteína. Sob determinadas circunstâncias apropriadas, um “redondo solitário” da degradação de Edman pode rachar o amino resíduo do término para produzir o derivado do ácido aminado com a adição de um N-término livre novo. Eventualmente, o amino término é separado da proteína, sem interromper a ligação das proteínas entre os outros ácidos aminados residuais.
  • Espectrometria em massa: Este é o método o mais apto para identificar o peso molecular da proteína exacta. Porque este método é muito sensível e favorável ao processamento rápido de diversas amostras, esta técnica tornou-se popular para identificar os tipos diferentes das proteínas que estam presente em uma amostra complexa. Daqui, a espectrometria em massa pode ser usada para a determinação da seqüência das proteínas e assim da identidade da proteína em uma maneira conceptual como descrita acima, com base em uma degradação de Edman.

Revisto por Afsaneh Khetrapal BSc (Hons)

Fontes:

  1. http://www.geneontology.org/page/protein-complexes
  2. http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/mas.21485/abstract
  3. https://library.ndsu.edu/tools/dspace/load/?file=/repository/bitstream/handle/10365/4777/farm_34_05_01.pdf?sequence=1
  4. https://www.mcgill.ca/biochemistry/files/biochemistry/458_silvius_17.pdf
  5. http://people.umass.edu/~mcclemen/581Proteins.html
  6. https://www.atascientific.com.au/3-protein-analysis-techniques/
  7. http://www.covalx.com/protein_complex_analysis

Last Updated: May 24, 2019

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