Análisis del complejo de la proteína

Las proteínas, también llamadas los polipéptidos, son los polímeros de aminoácidos. Hay un total de veinte aminoácidos llamados los monómeros que existen naturalmente en proteínas. Las proteínas se encuentran en abundancia y se distinguen de uno a según el número, el tipo, y la ordenación de los aminoácidos en serie, que comprenden el apoyo principal de polipéptidos.

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Por diversas razones, las proteínas son los componentes principales de la comida, así como una fuente importante para producir energía. Las proteínas están generalmente presentes en muchos tipos naturales de la comida tales como pescados o carne. Muchas de las proteínas en comida son las enzimas que pueden perfeccionar algunas reacciones bioquímicas. La presencia de aminoácidos en proteínas es muy esencial para la salud humana.

Métodos implicados en analizar la proteína

Diversas proteínas tienen diversas estructuras moleculares, propiedades fisioquímicas, y atributos alimenticios. Tres pasos importantes están implicados en análisis de la proteína.

1. Separación de la proteína

Los siguientes son algunos de los métodos comunes para separar las proteínas:

  • SDS (sulfato dodecyl de sodio) - PAGINACIÓN: La separación de la proteína con este método se basa en el peso molecular, en comparación con doblez o carga. Los factores con excepción del peso molecular, sin embargo, pueden también afectar al movimiento de proteínas en el gel del SDS, que era analizado en un grupo del curso. Esta técnica se utiliza ampliamente en genética, bioquímica, biología molecular, y medecina legal.
  • Concentración isoeléctrica: La separación de proteína con este método es relacionada sobre equilibrio entre los aminoácidos constitutivos (básicos) cargados (ácido) y positivo cargados de la negativa, que define una propiedad llamada punto isoeléctrico (PI) de la proteína. La carga neta de las proteínas en el pH llega a ser exacto cero. Proteínas que varían cerca tan pequeño como un único residuo cargado se puede aislar con este método.

Por otra parte, sin embargo, las proteínas de diversas tallas con un valor similar del pi se pueden colocar en el mismo lugar. A menudo, dos métodos cromáticos se utilizan para la separación de proteínas o aún para la separación del péptido.

  • Los métodos de alto rendimiento de la cromatografía (HPLC) líquida se utilizan para separar y purificar los péptidos o las proteínas en base de carga, de talla, o en general de hydrophobicity.
  • La cromatografía de capa delgada (TLC) también se ha utilizado para separar los péptidos en base de sus propiedades similares.
  • Electroforesis del gel con las dos-dimensiones (2.as): Esto es una técnica potente usada generalmente para analizar muestras complejas, pero no puede ser utilizada para algunos o las proteínas específicas, en interés de caracterizar todas las variedades de muestras de la proteína. En este método, primero la proteína se pasa en un camino estrecho del gel de alcance isoeléctrico. De acuerdo con el punto isoeléctrico la proteína puede ser separada.

Entonces el gel de alcance isoeléctrico se sitúa sobre el gel de SDS-PAGE y se ejecuta en la dirección perpendicular. Las proteínas funcionadas con como sitios y su posición se basan en su talla y propiedades cargadas. Esto ofrece una separación potente de proteínas usando cualquiera de estos dos geles solamente, que son concentración isoeléctrica o SDS-PAGE.

2. El borrar occidental

Immunoblotting se considera la versión más general de borrar occidental y se utiliza conjuntamente con métodos cromatográficos. Este método se utiliza para determinar las proteínas específicas dentro de un pedazo dado de extracto de tejido o de homogenado. La muestra de la proteína primero electrophoresed usando la paginación del SDS para la separación de proteínas en base de peso molecular.

Después de esto, el gel mojado se coloca contra la hoja de la nitrocelulosa y se mantiene una clase especial de cámara electroforética. Después de eso, un campo eléctrico se pasa en el gel que hace la proteína moverse del gel y también sobre la hoja de la nitrocelulosa en la cual se adsorbe apretado. Luego, la hoja de la nitrocelulosa con esto proteína apretado limitada se puede “sondar” o “borrar” con los anticuerpos, específicamente para apuntar la proteína.

3. Identificación de la proteína

Si el sitio o la banda de la proteína fue encontrado en un gel, el paso siguiente es determinar su identidad molecular. Los dos métodos común disponibles para este método están como sigue.

  • Degradación de Edman: Este método fue desarrollado por Pehr Edman. Él utilizó los reactivos llamados los isothiocyanates para actuar y para reaccionar con el N-término del péptido o de la proteína. Bajo ciertas condiciones convenientes, un “redondo solitario” de la degradación de Edman puede partir el residuo amino del término para producir el derivado del aminoácido con la adición de un nuevo N-término libre. Eventual, el término amino se separa de la proteína, sin la interrupción de la vinculación de proteínas entre los otros aminoácidos residuales.
  • Espectrometría de masa: Éste es el método más conveniente para determinar el peso molecular de la proteína exacta. Porque este método es muy sensible y favorable al tramitación rápido de varias muestras, esta técnica ha llegado a ser popular para determinar las diversas clases de proteínas que están presentes en una muestra compleja. Por lo tanto, la espectrometría de masa se puede utilizar para la determinación de la serie de las proteínas y así de la identidad de la proteína en una manera conceptual como arriba haber descrito, sobre la base de una degradación de Edman.

Revisado por Afsaneh Khetrapal BSCA (Hons)

Fuentes:

  1. http://www.geneontology.org/page/protein-complexes
  2. http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/mas.21485/abstract
  3. https://library.ndsu.edu/tools/dspace/load/?file=/repository/bitstream/handle/10365/4777/farm_34_05_01.pdf?sequence=1
  4. https://www.mcgill.ca/biochemistry/files/biochemistry/458_silvius_17.pdf
  5. http://people.umass.edu/~mcclemen/581Proteins.html
  6. https://www.atascientific.com.au/3-protein-analysis-techniques/
  7. http://www.covalx.com/protein_complex_analysis

Last Updated: May 24, 2019

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