Variation d'organisme de RNAi

RNAi est un puissant outil à utilisé pour définir des mécanismes cellulaires, et analyse les fonctions des gènes des organismes variés dans les laboratoires mondiaux.

Crédit : petarg/Shutterstock.com

Des éclats de l'ARN comportant les petites molécules de intervention d'ARN (siRNA) qui bloquent le fonctionnement des gènes spécifiques par l'intermédiaire d'un procédé naturel est connus comme interférence ARN (RNAi), qui est également amortissement appelé de gène.

L'interférence ARN est connue pour varier dans différents organismes, variant dans le rendement de haut en bas, basé sur l'organisme spécifique. En raison de cette variation, RNAis différent sont employés dans les organismes modèles génétiques tels que des eucaryotes, des insectes, des mammifères, et des centrales pour vérifier les fonctionnements de différents gènes.

RNAi dans les eucaryotes

L'ARN bicaténaire est déterminé comme inhibiteur efficace pour l'élimination d'une séquence spécifique d'expression du gène dans les eucaryotes, tels que des elegans de C. RNAi peut être réalisé dans les eucaryotes des voies suivantes :

  • Imbiber simplement la vis sans fin dans des medias siRNA-contenants
  • Directement injection de l'ARN à double brin dans la vis sans fin de nématode
  • En alimentant les bactéries de vis sans fin qui expriment des siRNAs

RNAi s'est avéré pour faciliter l'inverse et la génétique avant. Deux mutants tels qu'eri-1 et rrf-3 ont été recensés utilisant RNAi, qui sont utiles pour étudier le système nerveux de nématode. Ce modèle de vis sans fin d'elegans de C. est utile comme outil principal pour étudier des troubles neuraux et neurodegenerative. L'intégration de tels outils génomiques avec un mécanisme amélioré et rapide aide à réaliser des projets de grande puissance en raison du développement rapide des applications de RNAi.

RNAi dans les insectes

RNAi était premier montré dans le melanogaster de D. par l'inoculation de l'ARN à double brin dans ses embryons. Ce type de méthode de la distribution de RNAi a la limitation que RNAi ne dure que durant une courte période seulement dans les embryons des mouches. Ce problème est resolved utilisant un transgène stablement intégré d'ARN à double brin d'épingle à cheveux. En injectant l'ARN à double brin dans l'abdomen de la mouche adulte, RNAi peut être réalisé dans tout le fuselage.

Davantage de RNAi multiple recherche ont été effectués utilisant la culture cellulaire de drosophile et RNAi a été accompli en ajoutant l'ARN à double brin dans la culture cellulaire. Une méthode de dépistage de RNAi avec le débit élevé a été développée utilisant cette culture cellulaire pour recenser les gènes qui associent à la morphogénèse de cellules.

Appliquant largement - des méthodes et les protocoles procurables, la méthode de dépistage de puce ADN de vivre-cellule de RNAi ont été développés, qui était un autre avancement significatif de RNAi. Dans cette méthode, des cellules de drosophile sont directement cultivées sur le haut des dsRNAs estampés sur les puces ADN en verre. Le mécanisme de RNAi de puce ADN peut être utilisé pour l'examen critique complet du génome de mouche sur trois lamelles de verre normales pour l'étude des interactions génétiques, pendant que deux gènes peuvent être supprimés immédiatement.

RNAi dans les mammifères

Pour analyser la fonction des gènes dans n'importe quel système empirique, RNAi est employé pour éliminer l'expression des gènes spécifiques et pour observer les effets donnants droit. Cette méthode a gagné l'importance dans les systèmes mammifères par la création des modèles knockout de souris.

Bien que ce soit un modèle efficace, il a quelques problèmes comme suit :

  • Des effets de développement ou de cellule-type-détail ne peuvent pas être étudiés utilisant ce modèle jusqu'à ce que des coups de grâce de tissu-détail soient utilisés ;
  • La formation des modèles knockout absorbe plus de temps, et exige le travail fort.
  • Cependant, ces problèmes ont la solution théorique d'adapter des techniques de RNAi.

Des vecteurs comprenant le siRNA et l'ARNsh sont injectés dans les souris adultes, avec la composition de lipide cationique, dans certains cas. Pour le transfert couronné de succès des shRNAs dans le cerveau des souris adultes, des vecteurs adénoviraux et lentiviral sont injectés, qui suppriment promptement l'expression de la protéine fluorescente verte améliorée (eGFP).

Dans cette séquence expérimentale, des inoculations de RNAi ont été exécutées au striatum droit et des mises en place d'eGFP ont été faites dans l'hémisphère controlatéral. Puis, on a observé l'eGFP de précipitation pendant une semaine, qui est également réalisée par la mise en place de l'ARNsh lentiviral par semaine plus tard, à la suite de l'inoculation d'eGFP.

La précipitation des gènes endogènes peut également être accomplie en utilisant RNAi viral-assisté. Dans des neurones de mi-cerveau des souris adultes, l'inoculation d'un ARNsh adénoviral qui vise hydroxylase de tyrosine a masqué la synthèse de la dopamine et a mené à fonctionner graduel réduit.

RNAi aux plantes cultivées

RNAi peut être réalisé aux centrales par l'intermédiaire des transgènes, qui produisent l'ARN d'épingle à cheveux. RNAi a des mérites au-dessus de l'amortissement antisens-assisté et de la Co-élimination de gène basés sur sa stabilité et rendement, qui aide dans l'amélioration génétique des plantes cultivées. Il a la capacité de découper l'expression du transgène des familles de multigene d'une façon réglée, et il propose également plusieurs avantages par rapport à la génétique inverse basée sur mutation.

Outlook

Les études multiples sont actuelles sur l'ARN amortissant pour améliorer la compréhension du mécanisme de RNAi, et promettant son application dans la recherche et le domaine de demande de règlement. Ce mécanisme est économique et rend l'énorme souplesse.

Un autre aspect inestimable de RNAi est sa capacité de produire des résultats phénotypiques dépendants de la dose et classés. La neurobiologie retire les avantages grands de la méthode de RNAi, comme d'autres champs de recherche. RNAi a les ensembles d'outils génétiques radicaux à disposition, particulièrement pour des chercheurs de la neurobiologie concernant le système expérimental de rat.

Last Updated: Feb 26, 2019

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