Variação do organismo de RNAi

RNAi é uma ferramenta poderosa ao usado para definir mecanismos celulares, e analisa as funções do gene de vários organismos nos laboratórios no mundo inteiro.

Crédito: petarg/Shutterstock.com

Os fragmentos do RNA que compreendem as moléculas de interferência pequenas do RNA (siRNA) que obstruem a função de genes específicos através de um processo natural são sabidos como a interferência do RNA (RNAi), que é chamada igualmente silêncio do gene.

A interferência do RNA é sabida para variar nos organismos diferentes, variando na eficiência da elevação ao ponto baixo, com base no organismo específico. Devido a esta variação, RNAis diferente é usado em organismos modelo genéticos tais como eukaryotes, insectos, mamíferos, e plantas para investigar as funções de genes individuais.

RNAi nos eukaryotes

o RNA Dobro-encalhado é determinado como um inibidor eficiente para a supressão de uma seqüência específica da expressão genética nos eukaryotes, tais como elegans do C. RNAi pode ser conseguido nos eukaryotes das seguintes maneiras:

  • Simplesmente embebendo o sem-fim em media decontenção
  • Directamente injetando o dsRNA no sem-fim do nemátodo
  • Alimentando as bactérias do sem-fim que expressam siRNAs

RNAi foi encontrado para facilitar o reverso e a genética dianteira. Dois mutantes tais como eri-1 e rrf-3 foram identificados usando RNAi, que são úteis estudar o sistema nervoso do nemátodo. Este modelo do sem-fim dos elegans do C. é útil como uma ferramenta chave para estudar desordens neurais e neurodegenerative. A integração de tais ferramentas genomic com um mecanismo melhorado e rápido ajuda a conseguir projectos em grande escala em conseqüência da revelação rápida de aplicações de RNAi.

RNAi nos insectos

RNAi era primeiro mostrado no melanogaster do D. pela inoculação do dsRNA em seus embriões. Este tipo de método da entrega de RNAi tem a limitação que RNAi dura por somente um curto período nos embriões das moscas. Este problema é resolved usando um transgene estàvel integrado do dsRNA do gancho de cabelo. Injetando o dsRNA no abdômen da mosca adulta, RNAi pode ser conseguido durante todo o corpo.

Um RNAi múltiplo mais adicional pesquisa foi realizado usando a cultura celular da drosófila e RNAi foi realizado adicionando o dsRNA na cultura celular. Um método de selecção de RNAi com produção alta foi desenvolvido usando esta cultura celular para identificar os genes que se relacionam à morfogênese da pilha.

Usando métodos amplamente disponíveis e protocolos, o método de selecção do microarray da viver-pilha de RNAi foi desenvolvido, que era um outro avanço significativo de RNAi. Neste método, as pilhas da drosófila são cultivadas directamente na parte superior dos dsRNAs impressos nos microarrays de vidro. O mecanismo de RNAi do microarray pode ser utilizado para a selecção completa do genoma da mosca em três placas de vidro padrão para o estudo de interacções genéticas, enquanto dois genes podem ser suprimidos imediatamente.

RNAi nos mamíferos

Para analisar a função do gene em todo o sistema empírico, RNAi é usado para eliminar a expressão dos genes específicos e para observar os efeitos resultantes. Este método ganhou a importância em sistemas mamíferos pela criação de modelos dos ratos do KO.

Embora seja um modelo eficaz, tem alguns problemas como segue:

  • Os efeitos desenvolventes ou pilha-tipo-específicos não podem ser estudados usando este modelo até que os KO tecido-específicos estejam empregados;
  • A formação de modelos do KO consome mais tempo, e exige o trabalho intenso.
  • Contudo, estes problemas têm a solução teórica de adaptar técnicas de RNAi.

Os vectores que incluem o siRNA e o shRNA são injectados em ratos adultos, junto com a composição de lipido cationic, em alguns casos. Para transferência bem sucedida dos shRNAs no cérebro de ratos adultos, os vectores adenoviral e lentiviral são injectados, que suprimem prontamente a expressão fluorescente verde aumentada (eGFP) da proteína.

Nesta seqüência experimental, as inoculações de RNAi foram executadas no striatum direito e as inserções do eGFP foram feitas no hemisfério contralateral. Então, o eGFP do knockdown foi observado por uma semana, que fosse conseguido igualmente pela inserção do shRNA lentiviral um a semana mais tarde, no seguimento da inoculação do eGFP.

O knockdown de genes endógenos pode igualmente ser realizado utilizando RNAi viral-negociado. Nos neurônios do meados de-cérebro de ratos adultos, a inoculação de um shRNA adenoviral que visasse hydroxylase da tirosina obstruiu a síntese da dopamina e conduziu-a ao trabalho progressivo reduzido.

RNAi em plantas de colheita

RNAi pode ser conseguido nas plantas através dos transgenes, que produzem o RNA do gancho de cabelo. RNAi tem méritos sobre o silêncio e a co-supressão antisentido-negociados do gene baseados em suas estabilidade e eficiência, que ajuda na melhoria genética de plantas de colheita. Tem a capacidade para eliminar a expressão do transgene das famílias do multigene em uma maneira regulada, e igualmente sugere diversas vantagens sobre genéticas reversas mutação-baseadas.

Probabilidade

Os estudos múltiplos são em curso no RNA que silencia para melhorar a compreensão do mecanismo de RNAi, e prometendo sua aplicação na pesquisa e no campo do tratamento. Este mecanismo é econômico e rende a flexibilidade enorme.

Um outro aspecto inestimável de RNAi é sua capacidade para produzir resultados fenotípicos dependente da dose e classificados. A neurobiologia colhe o grande benefício do método de RNAi, como outras áreas de pesquisa. RNAi tem os conjuntos de ferramentas genéticos radicais à disposição, especificamente para pesquisadores da neurobiologia envolvendo o sistema experimental do rato.

Fontes:

  1. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/genome/rnai/
  2. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3249004/
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  8. https://entomology.ca.uky.edu/pallilab
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  10. https://ncats.nih.gov/rnai/about/action
  11. https://www.umassmed.edu/rti/biology/how-rnai-works/
  12. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15081052

[Leitura adicional: RNAi]

Last Updated: Feb 26, 2019

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