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Réduction de l'inhibition d'ACP en la Science légale

Il y a plusieurs molécules qui peuvent dégrader l'ADN et nuire la réaction d'ACP. Les inhibiteurs d'ACP peuvent gripper à l'ADN polymérase, agir l'un sur l'autre avec ADN lui-même, ou agir l'un sur l'autre avec de l'ADN polymérase pendant la prolonge d'amorce.

Illustration de scientifique mettant le tube d

Putita | Shutterstock

Inhibiteurs d'ADN polymérase

Le rapport de protéine et d'ADN est à forte asymétrie dans le sang humain ; pour chaque 1µl de sang, il y a au sujet de 35ng de protéine, qui peut nuire le procédé de polymérisation. Le Heme, une composante d'hémoglobine, a été également montré pour empêcher l'ACP. C'est dû au desserrage des ions de fer, qui affectent le pH de la réaction, et perturbe l'activité de polymérase, la sonde et les amorces. Pour cette raison, le heme est souvent considéré comme un inhibiteur universel d'ACP.

On l'a largement observé que l'hémoglobine perturbe l'ACP après avoir été désagrégé par la protéinase K, alors qu'il n'y a aucun effet d'hémoglobine non-assimilée. La mélanine est un autre melabolite connu pour empêcher la polymérase de Taq. L'augmentation de la concentration pour des polymérases de Taq a été proposée pour les acides humiques qui empêchent l'ACP.

Inhibiteurs d'acide de noyaux

Les acides nucléiques empêchent l'adoucissement ou la prolonge d'amorce, et ainsi, affectez le point de fusion ou la conformation de l'ADN. L'immunoglobuline G (IgG) s'est avérée pour former un composé avec l'ADN échoué unique et pour empêcher l'ACP. On l'a constaté que bien que la polymérase de Taq, Ampli Taq, Pwo ne puisse pas amplifier l'ADN en présence de l'IgG, l'enzyme de Tth peut encore.

Inhibiteurs de fluorescence

Dans l'ACP de temps réel, les inhibiteurs qui peuvent affecter le signe de fluorescence sont présents. C'est dû aux changements de la concentration en ion, ou le grippement et le trempage des fluorophores. Les acides humiques séquestrent le bromure d'éthidium et réduisent l'interaction d'ADN. Cet effet augmente avec l'augmentation de la longueur de tube et du volume inférieur, ainsi ces des soins grands devraient être pris avec ces facteurs.

Tampons d'ACP

BSA est un facilitateur courant d'ACP. Il peut gripper aux acides gras et les molécules organiques et cette capacité obligatoire peuvent réduire l'inhibition pendant l'amplification in vitro. Elle peut également gripper aux inhibiteurs, tels que le heme et la mélanine et les empêcher de gripper à l'ADN polymérase.

En présence de BSA, les inhibiteurs tels que des phénols grippent à BSA au lieu de la polymérase. Différentes concentrations de BSA ont été vérifiées pour réduire l'effet d'inhibition.

Indépendamment de BSA, des détergents minéraux, tels que le tween 20 et le triton X sont également employés pour faciliter l'opération d'amplification. Parmi les solvants organiques, DMSO et formamide sont employés pour réduire l'inhibition. Les corps dissous biologiquement compatibles, tels que la bétaïne et le glycérol, et les polymères, y compris l'ANCRAGE et le dextrane sont employés souvent.

Méthodes de prélèvement qui affectent la fiabilité d'ACP

Les bonnes méthodes de prélèvement peuvent également réduire les effets d'inhibition d'ACP. Pendant l'analyse de l'ADN légale, la taille de l'échantillon ADN peut être très petite, et là peut une présence de fond élevé, par exemple eaux résiduaires. À cet effet, l'échantillonnage direct, où le matériau est directement mis dans le tube de demande de règlement pour augmenter le nombre de cellules cibles, est employé.

Le nettoyage extérieur peut également être employé pour réduire les niveaux des inhibiteurs d'ACP qui peuvent être présents dans le substrat. Les écouvillons peuvent également être humidifiés utilisant saline pour améliorer la guérison de cellules. Des écouvillons en nylon peuvent également être utilisés pour augmenter le numéro de cellules.

Traitement Pré-ACP

Les inhibiteurs à l'ACP peuvent entrer à différentes opérations du procédé-échantillonnage d'ACP, de la demande de règlement d'échantillon et de l'ACP. Ceci peut être réduit à l'aide des ADNs polymérase qui sont les facilitateurs thermostables et d'ACP. Le traitement Pré-ACP permet à des échantillons avec la précision analytique élevée d'être produits.

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Last Updated: Dec 17, 2018

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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