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Microscopie de contraste de réflexion pour l'immunocytochimie

La microscopie de contraste de réflexion est employée aux cellules d'image avec la haute résolution et la sensibilité améliorée. Car cette technique peut produire des images élevées de définition aux profondeurs de pénétration élevées, elle est utilisée généralement en immunocytochimie.

La microscopie de contraste de réflexion a des applications en immunocytochimieLebendkulturen | Shutterstock

Méthode de microscopie de contraste de réflexion

La microscopie de contraste de réflexion peut des petites parties d'image de cellules en supprimant des réflexions égarées. C'est nécessaire quand des échantillons biologiques de représentation, parce que les objectifs biologiques tendent à avoir des intensités de lumière réfléchie en-dessous de 1% de la lumière d'incident comparée à l'intensité de réflexion de 4% à une glace à la surface adjacente d'air, qui sont courants sur des microscopes.

Le même montant d'élimination réalisé avec cette microscopie ne peut pas être réalisé utilisant d'autres microscopes. Pour supprimer des réflexions égarées, utilisations de microscopie de contraste de réflexion une source lumineuse monochromatique, en général 546 nanomètre, alors qu'un polariseur et une plaque d'onde quarte de lambda mènent à la polarisation et à la repolarisation elliptiques de la lentille antérieure. En même temps qu'un analyseur aligné, les réflexions exclusives de la partie atteignent l'oculaire.

Les polariseurs et la plaque d'onde utilisée dans la microscopie de contraste de réflexion représentent le principe d'antiflex où la lumière de réflexion d'objectif est tournée 90° relativement à la lumière d'incident, tenant compte de la représentation d'objectif. Les réflexions réalisées utilisant la microscopie de contraste de réflexion sont effectuées avec l'epi-illumination 45°. L'illumination conique et annulaire fusionne les caractéristiques de l'illumination de darkground.

La microscopie de contraste de réflexion peut des parties incroyablement minces d'image, vers le bas à 5 nanomètre, et une profondeur de pénétration du µm jusqu'à 30. Pour cette raison, les reconstructions 3D peuvent être produites. La microscopie de contraste de réflexion agit en tant que passerelle entre la photomicroscopie et la microscopie électronique, et emploie type un gabarit de microscope de fluorescence avec des adaptations méthodologiques pour produire d'une image de microscopie de contraste de réflexion.

Application de la microscopie de contraste de réflexion à l'immunocytochimie

La microscopie de contraste de réflexion a été initialement développée pour l'usage en minéralogie et ses applications dans la biologie ont seulement apparu très récent, y compris l'hybridation et l'immunocytochimie in situ. Cette microscopie peut être appliquée aux cellules vivantes, qui peuvent être marquées utilisant l'immunocytochimie.

La première étape est de fixer les cellules. Il est important que le fixatif soit doux pour mettre à jour l'antigénicité, alors que les fixatifs intenses sont nécessaires pour des études morphologiques. Des molécules encastrantes généralement et de marquages utilisées dans des études de localisation d'immunocytochimique peuvent également être appliquées aux études de microscopie de contraste de réflexion.

Il y a deux méthodes principales pour préparer un échantillon pour la microscopie de contraste de réflexion : l'immuno-incubation peut être exécutée avant ou après que le tissu soit encastré.

Pré-encastrant l'immunocytochimie voit le tissu étant découpé en tranches dans 70-90 parties épaisses de µm, qui alors immunostained et sont incluses en plastique. Après ceci, elles sont coupées en parties ultra-minces. Les utilisations courantes de pré-encastrer l'immunocytochimie sont marquage intercellulaire de la matrice extracellulaire dans un tissu.

En immunocytochimie goujon-encastrante, le tissu est découpé en tranches immédiatement en parties ultra-minces qui sont incluses et puis souillées. Le type d'inclure des medias utilisés en immunocytochimie goujon-encastrante peut affecter l'accessibilité des sites antigéniques pour les anticorps, qui peuvent rendre nécessaire d'autres opérations gravure, par exemple avec Epon.

Goujon-encastrer l'immunocytochimie est employé souvent à l'image l'intérieur d'une cellule parce que la cellule doit être sectionnée dans les parties ultra-minces pour réaliser la définition intracellulaire.

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Last Updated: Apr 1, 2019

Sara Ryding

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Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

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