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Microscopia di contrasto del riflesso per Immunocytochemistry

La microscopia di contrasto del riflesso è usata alle celle di immagine con l'alta risoluzione e la sensibilità migliore. Poichè questa tecnica può generare le alte immagini della definizione alle alte profondità di infiltrazione, è comunemente usata in immunocytochemistry.

La microscopia di contrasto del riflesso ha applicazioni in immunocytochemistryLebendkulturen | Shutterstock

Metodo di microscopia di contrasto del riflesso

La microscopia di contrasto del riflesso può piccole sezioni di immagine delle celle sopprimendo i riflessi smarriti. Ciò è necessaria quando campioni biologici della rappresentazione, perché gli oggetti biologici tendono ad avere intensità della luce della luce riflessa inferiore a 1% di luce incidente confrontata all'intensità del riflesso di 4% ad un vetro all'interfaccia radio, che sono comuni sui microscopi.

La stessa quantità di soppressione raggiunta con questa microscopia non può essere raggiunta facendo uso di altri microscopi. per sopprimere i riflessi smarriti, usi di microscopia di contrasto del riflesso una sorgente luminosa monocromatica, in genere 546 nanometro, mentre un polarizzatore e una lastra grossa di onda quarta di lambda piombo a polarizzazione ed a ripolarizzazione ellittiche della lente anteriore. Insieme ad un analizzatore stato allineato, i riflessi esclusivi dalla sezione raggiungono l'oculare.

I polarizzatori e la lastra grossa dell'onda utilizzata nella microscopia di contrasto del riflesso rappresentano il principio del antiflex dove l'indicatore luminoso del riflesso dell'oggetto è girato 90° riguardante la luce incidente, tenendo conto la rappresentazione dell'oggetto. I riflessi raggiunti facendo uso di microscopia di contrasto del riflesso sono fatti con l'epi-illuminazione 45°. L'illuminazione conica e anulare fonde le funzionalità dell'illuminazione del darkground.

La microscopia di contrasto del riflesso può sezioni incredibilmente sottili di immagine, giù a 5 nanometro e una profondità di infiltrazione di µm fino a 30. A causa di questo, le ricostruzioni 3D possono essere create. La microscopia di contrasto del riflesso funge da ponte fra microscopia leggera e microscopia elettronica e tipicamente usa un supporto del microscopio di fluorescenza con gli adattamenti metodologici per generare un'immagine di microscopia di contrasto del riflesso.

Applicando microscopia di contrasto del riflesso a immunocytochemistry

La microscopia di contrasto del riflesso originalmente è stata sviluppata per uso in mineralogia e le sue applicazioni nella biologia sono emerso soltanto molto recentemente, compreso l'ibridazione in situ e immunocytochemistry. Questa microscopia può applicarsi alle celle viventi, che possono essere contrassegnate facendo uso di immunocytochemistry.

Il primo punto è di fissare le celle. È importante che il fissativo è delicato mantenere l'antigenicità, mentre i forti fissativi sono necessari per gli studi morfologici. Le molecole generalmente d'incassassatura e di contrassegno utilizzate negli studi immunocytochemical della localizzazione possono anche applicarsi agli studi di microscopia di contrasto del riflesso.

Ci sono due metodi main per preparare un campione per microscopia di contrasto del riflesso: l'immuno-incubazione può essere realizzata prima o dopo il tessuto è incassato.

l'Pre-incassassatura immunocytochemistry vede il tessuto che è affettato in 70-90 sezioni spesse del µm, che poi immunostained ed incluse in plastica. A seguito di questo, sono sezioni ultrasottili incise. Gli usi comuni di pre-incassassatura immunocytochemistry sono contrassegno intercellulare della matrice extracellulare in un tessuto.

Nell'post-incassassatura immunocytochemistry, il tessuto è affettato immediatamente in sezioni ultrasottili che sono incluse e poi sono macchiate. Il tipo di includere i media utilizzati nell'post-incassassatura immunocytochemistry può pregiudicare l'accessibilità dei siti antigenici per gli anticorpi, che possono necessitare ulteriori punti incisione, per esempio con Epon.

l'Post-incassassatura immunocytochemistry è usata spesso all'immagine l'interno di una cella perché la cella deve essere sezionata nelle sezioni ultrasottili per raggiungere la risoluzione intracellulare.

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Last Updated: Apr 1, 2019

Sara Ryding

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Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

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