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Microscopia do contraste da reflexão para Immunocytochemistry

A microscopia do contraste da reflexão é usada às pilhas da imagem com alta resolução e sensibilidade melhorada. Porque esta técnica pode gerar imagens altas da definição em profundidades de penetração altas, é de uso geral em immunocytochemistry.

A microscopia do contraste da reflexão tem aplicações em immunocytochemistryLebendkulturen | Shutterstock

Método da microscopia do contraste da reflexão

A microscopia do contraste da reflexão pode secções pequenas da imagem das pilhas suprimindo reflexões dispersas. Isto for necessário quando amostras biológicas da imagem lactente, porque os objetos biológicos tendem a ter intensidades de luz refletida abaixo de 1% da luz de incidente comparada à intensidade da reflexão de 4% em um vidro à relação de ar, que são comuns em microscópios.

A mesma quantidade de supressão conseguida com esta microscopia não pode ser conseguida usando outros microscópios. Para suprimir reflexões dispersas, usos da microscopia do contraste da reflexão uma fonte luminosa monocromática, tipicamente 546 nanômetro, quando um polarizador e uma placa de onda de um quarto do lambda conduzirem à polarização e à re-polarização elípticas da lente anterior. Junto com um analisador alinhado, as reflexões exclusivas da secção alcançam o ocular.

Os polarizadores e a placa da onda usada na microscopia do contraste da reflexão esclarecem o princípio do antiflex onde a luz da reflexão do objeto é girada 90° relativo à luz de incidente, permitindo a imagem lactente do objeto. As reflexões conseguidas usando a microscopia do contraste da reflexão são feitas com epi-iluminação 45°. A iluminação cónica, anular funde as características da iluminação do darkground.

A microscopia do contraste da reflexão pode secções incredibly finas da imagem, para baixo a 5 nanômetro, e uma profundidade de penetração do µm até 30. Devido a isto, as reconstruções 3D podem ser criadas. A microscopia do contraste da reflexão actua como uma ponte entre a fotomicroscopia e a microscopia de elétron, e usa tipicamente um suporte do microscópio de fluorescência com adaptações metodológicas para gerar uma imagem da microscopia do contraste da reflexão.

Aplicando a microscopia do contraste da reflexão a immunocytochemistry

A microscopia do contraste da reflexão foi desenvolvida originalmente para o uso na mineralogia e suas aplicações na biologia têm emergido somente muito recentemente, incluindo a hibridação in situ e immunocytochemistry. Esta microscopia pode ser aplicada às pilhas vivas, que podem ser etiquetadas se usar immunocytochemistry.

A primeira etapa é fixar as pilhas. É importante que o fixador é suave manter a antigenitura, visto que os fixador fortes são necessários para estudos morfológicos. Geralmente, as moléculas de encaixotamento e de rotulagem usadas em estudos immunocytochemical da localização podem igualmente ser aplicadas aos estudos da microscopia do contraste da reflexão.

Há dois métodos principais para preparar uma amostra para a microscopia do contraste da reflexão: a immuno-incubação pode ser executada antes ou depois o tecido é encaixado.

Pre-encaixar immunocytochemistry considera o tecido que está sendo cortado em 70-90 secções grossas do µm, que immunostained e são encaixadas então no plástico. Depois disto, são cortados em secções ultrathin. Os usos comuns do pre-encaixotamento immunocytochemistry são rotulagem inter-celular da matriz extracelular em um tecido.

Em cargo-encaixar immunocytochemistry, o tecido é cortado imediatamente nas secções ultrathin que são encaixadas e manchadas então. O tipo de encaixar os media usados no cargo-encaixotamento immunocytochemistry pode afectar a acessibilidade de locais antigénicos para os anticorpos, que podem necessitar umas etapas mais adicionais gravura a água-forte, por exemplo com Epon.

Cargo-encaixar immunocytochemistry é usado frequentemente à imagem o interior de uma pilha porque a pilha precisa de ser seccionada em secções ultrathin para conseguir a definição intracelular.

Fontes

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Last Updated: Apr 1, 2019

Sara Ryding

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Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

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