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Microscopie de contraste de réflexion contre la microscopie de Brightfield

La microscopie de Brightfield a été très utilisée pour des centaines d'années, alors que la microscopie de contraste de réflexion est technologie relativement neuve. En tant qu'une des techniques de microscopie les plus tôt et les plus simples, la microscopie de brightfield est facilement accessible mais manque de la profondeur réalisée avec la microscopie de contraste de réflexion.

Cet article récapitule les similitudes et les différences de la microscopie et de la réflexion de brightfield contrastent la microscopie pour différentes applications.

les microscopes de brightfield ont été autour depuis de nombreuses annéesKonstantin Kolosov | Shutterstock

Microscopie de contraste de réflexion

La microscopie de contraste de réflexion a une profondeur de pénétration du µm jusqu'à 30 et une profondeur d'orientation étroite, qui active la possibilité des reconstructions 3D et des cellules vivantes de représentation.

Avantages

La microscopie de contraste de réflexion fonctionne en supprimant des réflexions égarées et en captant seulement cela qui vient de la partie visée. Elle emploie la lumière d'incident comme source lumineuse, et avec un polariseur et une plaque d'onde quarte de lambda elle polarise et repolarizes la lentille frontale.

En combination avec un analyseur convenable aligné, ceci permet à l'oculaire de recevoir seulement des réflexions de la partie visée. Ainsi. la microscopie de contraste de réflexion peut être appliquée aux polariseurs et aux plaques d'onde pour supprimer des réflexions égarées.

Limitations

L'image produite dans la microscopie de contraste de réflexion représente seulement la lumière réfléchie de l'objectif. C'est principalement difficile dans les échantillons biologiques parce que les objectifs biologiques ont des intensités de lumière réfléchie du bas moins de 1%, alors que les surfaces adjacentes de glace-air ont des intensités de réflexion de 4%.  

Microscopie de Brightfield comparée à la microscopie de contraste de réflexion

La microscopie de Brightfield peut être employée pour concevoir des cellules en contrastant le spécimen foncé avec la lumière lumineuse. La microscopie de Brightfield emploie la lumière transmise comme source lumineuse, comparée à la microscopie de contraste de réflexion qui emploie la lumière d'incident. La lumière traverse le spécimen et est rassemblée par la lentille objective, qui magnifie la lumière et la transmet davantage à une lentille sybilline par laquelle l'image est vue.

Pour voir les structures particulières, souillant, comme le fuchsin et les bleus de méthylène sont employés. Dans la microscopie de contraste de réflexion, l'interférence produite par des réflexions égarées sont enlevées à l'aide des machines ajoutées à une fluorescence ou à un photomicroscope.

La microscopie de Brightfield peut également être appliquée aux cellules vivantes et pour la reconstruction 3D une fois ajoutée aux accessoires de représentation. Elle exige type la souillure des cellules qui peuvent être tout à fait générales par rapport à l'immunocytochimie plus élevée de spécificité ou à l'hybridation in situ réalisée utilisant la microscopie de contraste de réflexion. Cependant, la souillure dans la microscopie de brightfield ne peut pas être effectuée sur les cellules sous tension.

Applications de microscopie de contraste de brightfield et de réflexion

La microscopie de Brightfield peut être employée pour produire des images de haute résolution, telles que plusieurs organismes agissant l'un sur l'autre ou plus grandes structures sous-cellulaires, telles que des bordures de cellules et des noyaux.

La microscopie de contraste de réflexion, approprié mieux à la représentation sous-cellulaire ou à la représentation des composants de la matrice extracellulaire. Cependant, en cellules avec les composantes sous-cellulaires intrinsèquement colorées, telles que des chloroplastes en cellules de centrale, la microscopie de brightfield peut être employée. L'agrandissement avec la microscopie de brightfield est limité aux spectres de longueur d'onde de la lumière visible.

Un des avantages primaires de la microscopie de brightfield est qu'il est facile de s'appliquer. Par exemple, la microscopie de brightfield est utilisée généralement dans les enquêtes criminelles aux échantillons de cheveu d'image et recense des restes alimentaires.

La microscopie de Brightfield est très conviviale, et est souvent les stagiaires de microscope sont au commencement familiarisées avec. La microscopie de contraste de réflexion est plus complexe, exigeant le matériel d'adaptation et la préparation des échantillons plus complexe avant la représentation. Cependant, la microscopie de contraste de réflexion peut être effectuée utilisant une fluorescence ou un microscope de lecture confocal de laser, si le matériel d'adaptation est appliqué.

Bien que les deux méthodes exigent un contrôle, il est légèrement plus critique dans la microscopie de contraste de réflexion parce que le contrôle peut déterminer si l'anticorps est lié aux sous-structures correctes.

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Last Updated: Apr 1, 2019

Sara Ryding

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Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

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