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Microscopia do contraste da reflexão contra a microscopia de Brightfield

A microscopia de Brightfield foi amplamente utilizada para centenas de anos, quando a microscopia do contraste da reflexão for relativamente nova tecnologia. Como uma das técnicas as mais adiantadas e as mais simples da microscopia, a microscopia do brightfield é facilmente acessível mas falta a profundidade conseguida com microscopia do contraste da reflexão.

Este artigo resume as similaridades e as diferenças da microscopia e da reflexão do brightfield contrastam a microscopia para aplicações diferentes.

os microscópios do brightfield estiveram ao redor por muitos anosKonstantin Kolosov | Shutterstock

Microscopia do contraste da reflexão

A microscopia do contraste da reflexão tem uma profundidade de penetração do µm até 30 e uma profundidade de foco estreita, que permite a possibilidade das reconstruções 3D e de pilhas vivas da imagem lactente.

Vantagens

A microscopia do contraste da reflexão opera-se suprimindo reflexões dispersas e somente capturando isso que vem da secção visada. Usa a luz de incidente como uma fonte luminosa, e junto com um polarizador e uma placa de onda de um quarto do lambda polariza e repolarizes a lente dianteira.

Em combinação com um analisador aceitàvel alinhado, isto permite o ocular receber somente reflexões da secção visada. Assim. a microscopia do contraste da reflexão pode ser aplicada aos polarizadores e às placas da onda para suprimir reflexões dispersas.

Limitações

A imagem criada na microscopia do contraste da reflexão representa somente a luz refletida do alvo. Isto é fundamental difícil em amostras biológicas porque os objetos biológicos têm intensidades de luz refletida do ponto baixo menos de 1%, visto que as relações do vidro-ar têm intensidades da reflexão de 4%.  

Microscopia de Brightfield comparada à microscopia do contraste da reflexão

A microscopia de Brightfield pode ser usada para visualizar pilhas contrastando o espécime escuro com luz brilhante. A microscopia de Brightfield usa a luz transmitida como uma fonte luminosa, comparada ao contraste da reflexão a microscopia que usa a luz de incidente. A luz passa através do espécime e é recolhida pela lente objetiva, que amplia a luz e a transmite mais a uma lente misteriosa através de que a imagem é vista.

Para ver as estruturas particulares, manchando, como o azul do fuchsin e de metileno é usada. Na microscopia do contraste da reflexão, a interferência criada por reflexões dispersas é removida usando a maquinaria adicionada a uma fluorescência ou a um fotomicroscópio.

A microscopia de Brightfield pode igualmente ser aplicada às pilhas vivas e para a reconstrução 3D quando acoplada com acessórios da imagem lactente. Exige tipicamente a mancha das pilhas que podem ser bastante gerais em comparação com a especificidade mais alta immunocytochemistry ou a hibridação in situ conseguida usando a microscopia do contraste da reflexão. Contudo, manchar na microscopia do brightfield não pode ser realizada em pilhas vivas.

Aplicações da microscopia do contraste do brightfield e da reflexão

A microscopia de Brightfield pode ser usada para gerar imagens de alta resolução, tais como diversos organismos que interagem ou estruturas subcelulares maiores, tais como beiras da pilha e núcleos.

A microscopia do contraste da reflexão, é serida melhor para a imagem lactente subcelular ou a imagem lactente dos componentes da matriz extracelular. Contudo, nas pilhas com componentes subcelulares intrìnseca coloridos, tais como o cloroplastos em pilhas da planta, a microscopia do brightfield pode ser usada. A ampliação com microscopia do brightfield é limitada aos espectros do comprimento de onda da luz visível.

Um dos benefícios preliminares da microscopia do brightfield é que é fácil se aplicar. Por exemplo, a microscopia do brightfield é de uso geral nas investigações penais às amostras do cabelo da imagem e identifica o alimento permanece.

A microscopia de Brightfield é muito de fácil utilização, e é os estudantes do microscópio é familiarizada frequentemente inicialmente com. A microscopia do contraste da reflexão é mais complexa, exigindo o equipamento da adaptação e uma preparação mais complexa da amostra antes da imagem lactente. Contudo, a microscopia do contraste da reflexão pode ser realizada usando uma fluorescência ou um microscópio de exploração confocal do laser, desde que o equipamento da adaptação é aplicado.

Embora ambos os métodos exijam um controle, é ligeira mais crítico na microscopia do contraste da reflexão porque o controle pode determinar se o anticorpo é limitado às subestruturas correctas.

Fontes

Further Reading

Last Updated: Apr 1, 2019

Sara Ryding

Written by

Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

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