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Microscopia del contraste de la reflexión comparado con la microscopia de Brightfield

La microscopia de Brightfield ha sido ampliamente utilizada para los centenares de años, mientras que la microscopia del contraste de la reflexión es relativamente nueva tecnología. Como una de las técnicas más tempranas y más simples de la microscopia, la microscopia del brightfield es fácilmente accesible pero falta la profundidad lograda con microscopia del contraste de la reflexión.

Este artículo resume las semejanzas y las diferencias de la microscopia y de la reflexión del brightfield ponen en contraste la microscopia para diversos usos.

los microscopios del brightfield han estado alrededor durante muchos añosKonstantin Kolosov | Shutterstock

Microscopia del contraste de la reflexión

La microscopia del contraste de la reflexión tiene una profundidad de penetración del µm hasta 30 y una profundidad del foco estrecha, que habilita la posibilidad de las reconstrucciones 3D y de las células vivas de la proyección de imagen.

Ventajas

La microscopia del contraste de la reflexión opera suprimiendo reflexiones perdidas y solamente capturando el que venga de la sección apuntada. Utiliza la luz de incidente como fuente de luz, y así como un polarizador y una placa de onda cuarta de la lambda polariza y repolariza la lente delantera.

Conjuntamente con un analizador decentemente alineado, esto permiso que el ocular recibe solamente reflexiones de la sección apuntada. Así. la microscopia del contraste de la reflexión se puede aplicar a los polarizadores y a las placas de la onda para suprimir reflexiones perdidas.

Limitaciones

La imagen creada en microscopia del contraste de la reflexión representa solamente la luz reflejada del objetivo. Esto es fundamental difícil en muestras biológicas porque los objetos biológicos tienen intensidades de luz reflejadas del ciclón menos el de 1%, mientras que los interfaces del cristal-aire tienen intensidades de la reflexión del 4%.  

Microscopia de Brightfield comparada a la microscopia del contraste de la reflexión

La microscopia de Brightfield se puede utilizar para visualizar las células por el contrario el espécimen oscuro con la luz brillante. La microscopia de Brightfield utiliza la luz transmitida como fuente de luz, comparada al contraste de la reflexión la microscopia que utiliza la luz de incidente. La luz pasa a través del espécimen y cerco por la lente de objetivo, que magnifica la luz y la transmite más lejos a una lente misteriosa a través de la cual se vea la imagen.

Para se utiliza ver las estructuras determinadas, manchando, por ejemplo azul del fuchsin y de metileno. En microscopia del contraste de la reflexión, la interferencia creada por reflexiones perdidas se quita usando la maquinaria adicional a una fluorescencia o a un microscopio liviano.

La microscopia de Brightfield se puede también solicitar a las células vivas y la reconstrucción 3D cuando está acoplada con los accesorios de la proyección de imagen. Requiere típicamente la coloración de las células que pueden ser muy generales con respecto a la especificidad más alta immunocytochemistry o al hibridación in situ logrado usando microscopia del contraste de la reflexión. Sin embargo, la coloración en microscopia del brightfield no se puede realizar en las células vivas.

Usos de la microscopia del contraste del brightfield y de la reflexión

La microscopia de Brightfield se puede utilizar para generar imágenes de alta resolución, tales como varios organismos que obran recíprocamente o estructuras subcelulares más grandes, tales como bandas de la célula y núcleos.

La microscopia del contraste de la reflexión, se adapta mejor para la proyección de imagen subcelular o la proyección de imagen de los componentes de la matriz extracelular. Sin embargo, en células con los componentes subcelulares intrínseco coloreados, tales como cloroplastos en células de la instalación, la microscopia del brightfield puede ser utilizada. El aumento con microscopia del brightfield se limita a los espectros de la longitud de onda de la luz visible.

Una de las ventajas primarias de la microscopia del brightfield es que es fácil aplicarse. Por ejemplo, sigue habiendo la microscopia del brightfield es de uso general en investigaciones penales a las muestras del pelo de la imagen y determina la comida.

La microscopia de Brightfield es muy convivial, y es los estudiantes del microscopio se familiariza a menudo inicialmente con. La microscopia del contraste de la reflexión es más compleja, requiriendo el equipo de la adaptación y una preparación más compleja de la muestra antes de proyección de imagen. Sin embargo, la microscopia del contraste de la reflexión se puede realizar usando una fluorescencia o un microscopio de exploración confocal del laser, con tal que el equipo de la adaptación sea aplicado.

Aunque ambos métodos requieran un mando, es ligeramente más crítico en microscopia del contraste de la reflexión porque el mando puede determinar si el anticuerpo está limitado a las subestructuras correctas.

Fuentes

Further Reading

Last Updated: Apr 1, 2019

Sara Ryding

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Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

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