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Técnica del polimorfismo de largo de fragmento (RFLP) de restricción

El polimorfismo de largo de fragmento de restricción (RFLP) es una técnica inventada en 1984 por el científico inglés Alec Jeffreys durante la investigación en enfermedades hereditarias. Se utiliza para el análisis de configuraciones únicas en la DNA hace fragmentos para genético distinguir entre los organismos - estas configuraciones se llaman Variable Number de las repeticiones en tándem (VNTRs).

El polimorfismo genético se define como las diferencias genéticas heredadas entre individuos hacia adentro sobre el 1% de población normal. La técnica del PTFR explota estas diferencias en series de la DNA para reconocer y para estudiar la variación intraspecies e interspecies.

Polimorfismo de largo de fragmento de restricción
Polimorfismo de largo de fragmento de restricción (RFLP)

Principio

Los endonucleases de la restricción son las enzimas que cortan la DNA muy larga en pedazos cortos. Cada endonuclease de la restricción apunta diversas series de nucleótido en un cabo de la DNA y por lo tanto corta en diversos sitios.

La distancia entre los sitios de la hendidura de cierto endonuclease de la restricción difiere entre los individuos. Por lo tanto, el largo de los fragmentos de la DNA producidos por un endonuclease de la restricción diferirá a través de ambos organismos y especies individuales.

¿Cómo trabaja?

El PTFR se realiza usando una serie de pasos contorneados abreviadamente abajo:

Extracción de la DNA

Para comenzar con, la DNA se extrae de sangre, de saliva o de otras muestras y se purifica.

Fragmentación de la DNA

La DNA purificada se digiere usando los endonucleases de la restricción. Los sitios de reconocimiento de estas enzimas son generalmente 4 a 6 pares bajos de largo. Cuanto más corta es la serie reconocida, mayor es el número de fragmentos generados de la digestión.

Por ejemplo, si hay una serie corta de GAGC que ocurra en varias ocasiones en una muestra de la DNA. El endonuclease de la restricción que reconoce la serie de GAGC corta la DNA en cada repetición de la configuración de GAGC.

Si una muestra relanza la serie de GAGC 4 veces mientras que otra muestra la relanza 2 veces, el largo de los fragmentos generados por la enzima para las dos muestras será diferente.

Electroforesis del gel

Los fragmentos de la restricción producidos durante la fragmentación de la DNA se analizan usando electroforesis del gel.

Los fragmentos están negativo - cargado y se pueden separar fácilmente por la electroforesis, que separa las moléculas basadas en su talla y carga. Las muestras hechas fragmentos de la DNA se colocan en la cámara que contiene el gel electroforético y dos electrodos.

Cuando un campo eléctrico es aplicado, los fragmentos emigran hacia el electrodo positivo. Fragmentos más pequeños se mueven más rápidamente a través del gel que sale los más grandes detrás y las muestras de la DNA se separan así en bandas distintas en el gel.

Visualización de bandas

El gel se trata con los tintes luminiscentes para hacer las bandas de la DNA visibles.

Usos del PTFR

El PTFR se ha utilizado para varios usos genéticos del análisis desde su invención.

Algunos de éstos enchavietan usos del PTFR son mencionados abajo:

  • Para determinar el estado de enfermedades genéticas tales como fibrosis quística en un individuo.
  • Para determinar o confirmar la fuente de una muestra de la DNA por ejemplo en pruebas o investigaciones penales de paternidad.
  • En la correspondencia genética para determinar los regímenes de recombinación que muestran la distancia genética entre los lugares geométricos.
  • Para determinar una onda portadora de una mutación enfermedad-que causa en una familia.

Desventajas del PTFR

Desde su invención, el PTFR ha sido técnicas ampliamente utilizadas de un análisis del genoma empleadas en ciencia forense, remedio, y estudios genéticos. Sin embargo, ha llegado a ser casi obsoleto con la llegada DNA relativamente simple y de la menos costosa que perfilaba tecnologías tales como la reacción en cadena de polimerasa (PCR).

El procedimiento del PTFR requiere pasos numerosos y lleva semanas los resultados del rendimiento, mientras que las técnicas tales como polimerización en cadena pueden amplificar series de la DNA del objetivo en un simple pocas horas.

Además, el PTFR requiere una muestra grande de la DNA, el aislamiento cuyo puede ser un proceso laborioso y que toma tiempo. En cambio, la polimerización en cadena puede amplificar cantidades minuciosas de DNA en cuestión de horas.

Debido a las razones numerosas tales como éstos, la técnica de la polimerización en cadena ha reemplazado en gran parte el PTFR en la mayoría de los usos que requerían la DNA que ordenaba por ejemplo la prueba de la paternidad o el análisis forense de la muestra.

Además, la identificación de los polimorfismos del único-nucleótido en el proyecto del genoma humano casi ha reemplazado la necesidad del PTFR en análisis del estado de la enfermedad.

Referencias

Further Reading

Last Updated: Jun 26, 2019

Susha Cheriyedath

Written by

Susha Cheriyedath

Susha has a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Chemistry and Master of Science (M.Sc) degree in Biochemistry from the University of Calicut, India. She always had a keen interest in medical and health science. As part of her masters degree, she specialized in Biochemistry, with an emphasis on Microbiology, Physiology, Biotechnology, and Nutrition. In her spare time, she loves to cook up a storm in the kitchen with her super-messy baking experiments.

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    Cheriyedath, Susha. (2019, June 26). Técnica del polimorfismo de largo de fragmento (RFLP) de restricción. News-Medical. Retrieved on September 19, 2021 from https://www.news-medical.net/life-sciences/Restriction-Fragment-Length-Polymorphism-(RFLP)-Technique.aspx.

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Comments

  1. Rachael Bartram Rachael Bartram Australia says:

    when saying "For example, if there is a short sequence of GAGC that occurs repeatedly in a sample of DNA. The restriction endonuclease that recognizes the GAGC sequence cuts the DNA at every repetition of the GAGC pattern." what is GAGC?

  2. Satyajeet Khare Satyajeet Khare India says:

    I see a 1980 paper Botstein et al, AJMG which mentions RFLP.

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