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Indicador do Ribosome: Aplicações na pesquisa

O indicador do Ribosome é in vitro uma técnica da evolução da proteína usada para identificar as proteínas que ligam fortemente a um alvo. Outros métodos similares a esta técnica incluem o indicador do fago, o indicador do mRNA, o indicador do fermento, e o indicador bacteriano; contudo, o indicador do ribosome fornece diversas vantagens.

Ribosomes múltiplos (polysomes) toda a uma costa de tradução de mRNA - Meletios VerrasMeletios Verras | Shutterstock

Por que o indicador do ribosome é usado?

O indicador do Ribosome pode ser usado para estudar as interacções da proteína-proteína que ocorrem durante o metabolismo diário. Além, a técnica permite que os cientistas identifiquem as proteínas e os antígenos actuais em determinadas doenças, desenvolvam drogas novas para obstruir caminhos no corpo, e compreendam como as proteínas interagem em sistemas biológicos normais.

Princípios de indicador do ribosome

Uma exigência fundamental atrás do indicador do ribosome é o acesso a uma grande biblioteca das seqüências do ADN que codificam proteínas. Estas seqüências são transcritas e traduzidas in vitro, mas o codon de parada de cada gene é removido.

A extremidade do gene é anexada a uma seqüência do espaçador, uma secção curto do ADN da não-codificação. Isto permite a tradução do gene no produto da proteína usando o ribosome, enquanto mantendo todos os componentes junto. A ausência de um condon da parada significa aquela no fim da tradução, o complexo do ribosome não pode desmontar na ausência do codon de parada.

O mRNA, o ribosome e a proteína toda a estada anexaram estàvel devido aos íons do magnésio e a uma baixa temperatura. Uma técnica chamada cromatografia de afinidade é executada então, usando uma proteína do limite do interesse aos grânulos em uma coluna, e então sendo executado sobre as amostras da transcrição e da tradução da biblioteca do ADN.

Se algumas das proteínas das seqüências do ADN têm a afinidade para a proteína do interesse, estarão limitadas e retidas na coluna. Podem então ser eluted e o mRNA é reverso transcrito no cDNA e amplificado usando o PCR.

Este cDNA pode submeter-se a mutações. O indicador do Ribosome é realizado então neste ADN alterado, com uma pressão mais grande da selecção, produzir uma proteína que tenha uma afinidade mais alta à proteína do interesse, conduzindo à selecção para o emperramento forte.

Vantagens do indicador do ribosome

A vantagem principal do indicador do ribosome é que liga o genótipo e o fenótipo, com o mRNA que está sendo limitado no mesmo complexo que a proteína que codifica para. Isto permite a amplificação fácil com PCR depois da identificação da proteína.

Além, o indicador do ribosome não confia na capacidade de uma pilha para ser transformado, como em outras técnicas. É conseqüentemente mais simples e menos complexo, exigindo menos etapas. Este método igualmente permite a mutação fácil das seqüências selecionadas do ADN, porque a biblioteca original não precisa de ser alterada.

Aplicações do indicador do ribosome

Projecto da droga

Projetando as proteínas que ligam fortemente a outras proteínas como os receptors podem potencial conduzir à revelação dos inibidores ou dos stimulators que podem influenciar muitos caminhos e parar o início da doença. Por exemplo, os peptides anti-bacterianos que indicam a actividade contra os tifos das salmonelas da bactéria, que causa a febre tifóide, foram descobertos usando o indicador do ribosome.

Os polipeptídeos que são encontrados no exterior do estafilococo - áureo foram identificados igualmente pelo indicador do ribosome, fornecendo avenidas novas para a revelação dos antibióticos.

Evolução do anticorpo

O indicador do Ribosome é um mecanismo importante na evolução da proteína, e pode melhorar a força e a estabilidade obrigatórias dos anticorpos. Os anticorpos foram produzidos que têm uma afinidade 40 vezes mais forte comparada ao anticorpo original. Isto pode promover a compreensão da interacção dos anticorpos com marcadores do cancro em uma pilha.

Nanotecnologia

Nanoparticles é ferramentas medicinais poderosas usadas nos diagnósticos e como um portador das drogas e das outras biomoléculas. as ligantes Alvo-obrigatórias são necessários nestas partículas, e podem ser projectadas pelo indicador do ribosome. In vitro a evolução da proteína e o indicador do ribosome estão tornando-se conseqüentemente sempre mais importantes enquanto as tecnologias medicinais se tornam.

Fontes

Further Reading

Last Updated: Jan 4, 2019

Written by

Jack Davis

Jack is a freelance scientific writer with research experience in molecular biology, genetics, human anatomy and physiology, and advanced analytical chemistry. He is also highly knowledgeable about DNA technology, drug analysis, human disease, and biotechnology.

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