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Preparação da amostra em TEM

Por Jeyashree Sundaram, MBA

A microscopia de elétron de transmissão (TEM) é uma técnica usada para estudar a estrutura de moléculas pequenas como proteínas ou vírus, assim como outras partículas na ciência material.

Crédito: Jose Luis Calvo/Shutterstock.com

Neste processo, a partícula a ser estudada é expor aos feixes de elétron sob um microscópio de alta resolução chamado um microscópio de elétron da transmissão e as micrografia ou as imagens capturadas são analisadas computacionalmente.

A preparação da amostra é uma etapa muito crucial em TEM e o método envolvido em preparar a amostra difere, segundo a natureza do material e da informação exigidos dele.

Preparação da amostra em TEM

O processo de preparação de espécime em TEM envolve muitas etapas:

Fixação: A fixação do espécime estabiliza a pilha de modo que mais adicional mude ou dano à pilha não aconteça. Com este processo, a amostra é preservada para dar a um instantâneo no timeof a pilha viva. A fixação pode ser feita com dois métodos como segue:

  1. Fixação química: Este método é usado estabilizando amostras biológicas. As substâncias químicas são moléculas de proteína usadas da relação dos tocross com moléculas próximas. Mais frequentemente o produto químico usado neste método é glutaraldehyde.
  2. Cryofixation: Este método envolve a congelação rápida da amostra no nitrogênio líquido ou no hélio do líquido. O índice de água na amostra obtem assim transformado em um formulário vítreo do gelo.

Enxaguadela: O processo de fixação do tecido pode causar a acidez aumentada no espécime. Para impedir esta circunstância e manter o pH, deve ser enxaguado correctamente usando um amortecedor tal como o cacodylate do sódio.

Fixação secundária: Para aumentar o contraste das estruturas da acta dentro do espécime e dar mais estabilidade, uma fixação secundária é realizada usando o tetroxide do ósmio (OsO4). Sem induzir nenhuma mudança nas características da estrutura, OsO4 transforma as proteínas em geles e aumenta o contraste entre o citoplasma próximo ligando regiões de cabeças do phospholipid.

Desidratação: A secagem de gelo, ou a desidratação, do espécime são o processo por que o índice de água no espécime é substituído com um solvente orgânico. O álcool etílico e a acetona são os solventes freqüentemente usados neste método. A desidratação é importante porque a resina de cola Epoxy usada em umas etapas mais adicionais não mistura com água.

Infiltração: Na infiltração, a resina de cola Epoxy é usada para penetrar a pilha, que então ocupará o espaço e fará a amostra duramente bastante para carregar a pressão da secção ou do corte. Este processo é chamado igualmente encaixar. A resina é mantida então em um forno em 60° durante a noite para permitir ajustar-se. Este processo é chamado polimerização.

Polonês: Após o encaixotamento, alguns materiais são sujeitados ao lustro. Polonês um espécime reduz riscos assim como outros problemas que podem minimizar a qualidade da imagem. Os abrasivos Ultrafine são usados para dar o espécime a espelho-como o revestimento.

Corte: Para o estudo sob um microscópio de elétron, a amostra deve ser semi-transparente permitir a passagem de feixes de elétron através dela. Para conseguir esta natureza semi-transparente, a amostra é seccionada em secções finas usando um vidro ou uma faca do diamante anexado a um dispositivo conhecido como ultramicrotome. O dispositivo tem uma calha que seja enchida com a água destilada.

O corte das secções é recolhido nesta calha e movido então para uma grade de cobre a ser vista sob o microscópio. O tamanho de cada secção deve estar entre 30 nanômetro e 60 nanômetro para obter a melhor definição.

Mancha: Manchar em espécimes biológicos é feita geralmente duas vezes - antes da desidratação e após a secção. Neste processo, os metais pesados gostam do urânio, chumbo, ou o tungstênio é usado para aumentar o contraste entre estruturas diferentes no espécime, e para dispersar igualmente os feixes de elétron.

Manchando antes que a hidratação estiver feita no bloco, quando na mancha após a secção, a amostra estiver expor momentaneamente a uma solução aquosa dos metais acima.

Um espécime cryofixed não pode submeter-se a todos estes procedimentos. Pode directamente ser sujeitado ao corte e então ser sombreado usando vapores da platina, do ouro, ou do carbono antes do visualização sob o TEM.

Crédito: vulgarisation/Youtube.com

Independentemente dos procedimentos gerais acima que são seguidos em preparar uma amostra para TEM, muitas outras técnicas estão igualmente disponíveis, como:

  • Íon-mineração: neste processo, a diluição da amostra está feita despedindo íons cobrados do argônio na superfície da amostra até que se torne transparente bastante. A técnica focalizada da íon-mineração usa íons do gálio estanhando.
  • Método de secção transversal: Este método é usado principal no estudo das relações.
  • Técnica da réplica: Usado somente se o espécime maioria usado para preparar secções finas não pode ser danificado.
  • Lustro do eletrólito: Este procedimento é usado para fazer amostras finas fora dos metais ou das ligas. Retirando o núcleo, rolando, a moedura, o descascamento, etc., são os métodos diferentes incluídos neste procedimento.

Fontes:

Further Reading

Last Updated: Feb 26, 2019

Comments

  1. Renata Lewandowska Renata Lewandowska France says:

    I don't think that the Polish (Polonais) has any particular relation with TEM sample preparation. However, the polish (polissage) can be indeed important...

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