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Preparación de la muestra en TEM

Por Jeyashree Sundaram, MBA

La microscopia electrónica de transmisión (TEM) es una técnica usada para estudiar la estructura de pequeñas moléculas como las proteínas o los virus, así como otras partículas en ciencia material.

Haber: Jose Luis Calvo/Shutterstock.com

En este proceso, la partícula que se estudiará se expone a los haces electrónicos bajo un microscopio de alta resolución llamado un microscopio electrónico de la transmisión y los micrográfos o las imágenes capturados se analizan de cómputo.

La preparación de la muestra es un paso muy crucial en TEM y el método implicado en la preparación de la muestra difiere, dependiendo de la naturaleza del material y de la información requeridos de él.

Preparación de la muestra en TEM

El proceso de la preparación de espécimen en TEM implica muchos pasos:

Fijación: La fijación del espécimen estabiliza la célula de modo que más futuro cambie o no suceso el daño a la célula. Con este proceso, la muestra se preserva para dar a una foto en timeof la célula viva. La fijación se puede hacer con dos métodos como sigue:

  1. Fijación química: Este método se utiliza para estabilizar muestras biológicas. Las substancias químicas son moléculas de proteína usadas del eslabón de los tocross con las moléculas próximas. Lo más frecuentemente la substancia química usada en este método es aldehído glutárico.
  2. Cryofixation: Este método implica la congelación rápida de la muestra en nitrógeno líquido o helio del líquido. El contenido en agua en la muestra consigue así transformado en una forma vítrea del hielo.

El enjuagar: El proceso de fijación del tejido puede causar acidez creciente en el espécimen. Para prevenir esta condición y mantener el pH, debe ser enjuagado correctamente usando un almacenador intermedio tal como cacodylate del sodio.

Fijación secundaria: Para aumentar el contraste de las estructuras del minuto dentro del espécimen y dar más estabilidad, una fijación secundaria se realiza usando el tetróxido del osmio (Oso4). Sin inducir ningún cambio en las características de la estructura, Oso4 transforma las proteínas en los geles y aumenta el contraste entre el citoplasma próximo atando regiones de culatas de cilindro del fosfolípido.

Deshidratación: La liofilización, o la deshidratación, del espécimen es el proceso por el cual el contenido en agua en el espécimen es reemplazado por un disolvente orgánico. El etanol y la acetona son los disolventes con frecuencia usados en este método. La deshidratación es importante pues la resina de epoxy usada en otros pasos no se mezcla con agua.

Infiltración: En la infiltración, la resina de epoxy se utiliza para penetrar la célula, que después ocupará el espacio y hará la muestra difícilmente bastante para soportar la presión del seccionamiento o de cortar. Este proceso también se llama el embutir. La resina entonces se mantiene un horno en 60° de noche para permitir fijar. Este proceso se llama polimerización.

Polaco: Después de embutir, algunos materiales se sujetan al pulido. El polaco de un espécimen reduce rayaduras así como otros problemas que pueden disminuir la calidad de la imagen. Los abrasivos ultrafinos se utilizan para dar el espécimen a espejo-como acabado.

El cortar: Para el estudio bajo un microscopio electrónico, la muestra debe ser semitransparente permitir el pasaje de los haces electrónicos a través de ella. Para lograr esta naturaleza semitransparente, la muestra se secciona en secciones finas usando un cristal o un cuchillo del diamante sujetado a un dispositivo conocido como ultramicrótomo. El dispositivo tiene un mínimo de presión que se llene de agua destilada.

El corte de las secciones cerco en este mínimo de presión y después se mueve a una rejilla de cobre que se verá bajo el microscopio. La talla de cada sección debe estar entre 30 nanómetro y 60 nanómetro para conseguir la mejor resolución.

Coloración: La coloración en especímenes biológicos se hace generalmente dos veces - antes de la deshidratación y después de seccionar. En este proceso, los metales pesados tienen gusto del uranio, guía, o el tungsteno se utiliza para aumentar el contraste entre diversas estructuras en el espécimen, y también para dispersar los haces electrónicos.

Manchando antes de que la hidración se haga en cuadra, mientras que en la coloración después de seccionar, la muestra se expone abreviadamente a una solución acuosa de los metales antedichos.

Un espécimen cryofixed puede no experimentar todos estos procedimientos. Puede ser sujetado directamente a cortar y después ser sombreado usando los vapores del platino, del oro, o del carbono antes de la visualización bajo el TEM.

Haber: vulgarización/Youtube.com

Aparte de los procedimientos generales antedichos que se siguen en la preparación de una muestra para TEM, muchas otras técnicas están también disponibles, por ejemplo:

  • Ión-explotación minera: en este proceso, la reducción de la muestra es hecha encendiendo los iones cargados del argón en la superficie de la muestra hasta que llegue a ser bastante transparente. La técnica enfocada de la ión-explotación minera utiliza los iones del galio para estañar.
  • Método seccionado transversalmente: Este método mayor se utiliza en el estudio de interfaces.
  • Técnica de la reproducción: Utilizado solamente si el espécimen a granel usado para preparar secciones finas no puede ser dañado.
  • Pulido del electrólito: Este procedimiento se utiliza para hacer muestras finas fuera de los metales o de las aleaciones. Vaciando, laminando, el esmerilar, la peladura, los etc., son los métodos diferentes incluidos en este procedimiento.

Fuentes:

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Last Updated: Feb 26, 2019

Comments

  1. Renata Lewandowska Renata Lewandowska France says:

    I don't think that the Polish (Polonais) has any particular relation with TEM sample preparation. However, the polish (polissage) can be indeed important...

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