Séparation de Flavinoids des protéines de plasma utilisant UHPLC-MS

Des flavonoïdes de centrale ont été montrées pour exercer une conséquence positive sur la santé des personnes, mais leurs effets physiologiques et métabolites demeurent mal compris. Une raison de ceci est que dès que les flavonoïdes atteindront le sang, elles grippent promptement aux protéines de plasma et doivent être libérées avant analyse.

Les scientifiques ont décrit une méthode pour séparer et analyser des flavonoïdes en assimilant des protéines de plasma avec des enzymes de protéase. La méthode a fourni de bonnes guérisons une fois déterminée la flavonoïde quercetin-3-O-glucuronide (Q3GlcA) et permis la quantification de la flavonoïde par la chromatographie liquide de pression ultra-haute s'est accouplé à la spectrométrie de masse tandem (UHPLC-MSn).

Des flavinoids de centrale peuvent être trouvés dans des comprimés de vitamines.Microgen | Shutterstock

Les flavonoïdes sont les métabolites secondaires phénoliques courantes à des centrales plus élevées. Il est réputé que nous reprennions des flavonoïdes avec notre alimentation quotidienne des sources végétales, et la recherche a proposé l'activité antioxydante et anticancéreuse des flavonoïdes avec des effets d'atténuation sur des maladies cardio-vasculaires. Cependant, puisque des flavonoïdes seront transformées dans notre tube digestif, on le comprend insuffisamment si les flavonoïdes, ou leurs métabolites ont un effet avec la pertinence physiologique.

Après avoir réussi le tractus gastro-intestinal, les flavonoïdes ou des métabolites sont absorbés dans la circulation sanguine, où ils grippent promptement avec des protéines de plasma. Ceci effectue l'analyse des flavonoïdes dans le sang contestant, avec des méthodes telles que la chromatographie liquide, puisque des protéines doivent être enlevées de l'échantillon sans retirer simultanément les flavonoïdes liées aux protéines.

Les méthodes précédentes d'extraction de protéine ont employé l'extraction en phase solide (SPE) ou l'extraction liquide-liquide (LLE), deux méthodes classiques pour la préparation des échantillons pour la chromatographie liquide. Tandis que ces méthodes sont efficaces dans l'enlèvement de protéine, les guérisons flavonoïdes n'ont pas été bien documentées.

Dans la présente étude, aboutie par professeur Andreas Schieber et M. Maike Passon, chercheurs au service des sciences de l'alimentation nutritionnelles et à l'université de Bonn (Allemagne) ont maintenant expliqué que la flavonoïde - le glucuronide (Q3GlcA) peut être récupéré du plasma en dégradant les protéines de plasma avec des enzymes de protéase. Avec l'extraction liquide-liquide suivante (LLE), les échantillons flavonoïdes convenaient pour l'analyse de chromatographie liquide.

La digestion de protéase relâche des flavonoïdes pour UHPLC-MSn

Les chercheurs ont dissous la flavonoïde Q3GlcA dans le plasma humain à une concentration connue et ont ajouté différentes protéases. Après 20 heures de digestion de protéase, les éclats donnants droit de peptide ont été précipités par l'ajout du solvant organique, laissant des flavonoïdes libres en solution. Les flavonoïdes se sont alors analysées par UHPLC-MSn équipées d'un spectromètre de masse de trappe linéaire d'ion, avec 6,3 mn se montent au temps de mesure.

Les chercheurs ont validé leur méthoden d'UHPLC-MS selon les directives de l'agence environnementale fédérale allemande (GFEA) et des Etats-Unis Food and Drug Administration (FDA des USA), de la manière prescrite pour les techniques de contrôle de qualité normale (QC).

La méthode a montré une bonne guérison des flavinoids

La pepsine de protéase, un réactif courant de biologie moléculaire, a efficacement relâché la flavonoïde Q3GlcA du plasma. Avec la digestion de pepsine, Q3GlcA a pu être mesuré avec la sensibilité élevée, même à une concentration en-dessous de 10 ng/ml.

Pour la comparaison, dans une étude précédente, on avait observé des concentrations flavonoïdes considérablement plus élevées dans le plasma, expliquant que cette méthode neuve sera appropriée pour vérifier les niveaux flavonoïdes physiologiques en nutrition étudie.

Les taux de guérison de Q3GlcA étaient 67 +/- 16%, et la méthode analytique a eu un coefficient de variation de 24 %. Tandis que les auteurs notaient que ces valeurs n'étaient pas encore conformes avec les directives de FDA des USA (>70% et <15%, respectivement), des améliorations peuvent être apportées en optimisant la méthode flavonoïde d'extraction après l'opération de digestion de protéase.

Que diriez-vous d'autres flavonoïdes ?

La digestion de protéase était efficace pour Q3GlcA de mesure dans le plasma par UHPLC-MSn, bien que d'autres améliorations soient exigées pour rendre cette méthode analytique conforme avec les directives de réglementation. Davantage de recherche devra maintenant vérifier si la méthode de digestion de protéase peut également être employée pour l'analyse d'autres composés flavonoïdes dans le plasma.

La recherche était publiée dans l'édition de juin 2019 du tourillon de la chimie des instruments aratoires et alimentaire.

Source

Kaiser M et autres, une approche novatrice à la préparation des échantillons de plasma pour l'analyse d'UHPLC−MS. Nourriture Chem 2019, 67, 23, 6665-6671 de J Agric ; DOI : 10.1021/acs.jafc.9b01782.

Further Reading

Last Updated: Jul 18, 2019

Christian Zerfaß, Ph.D.

Written by

Christian Zerfaß, Ph.D.

Christian is an enthusiastic life scientist who wants to understand the world around us. He was awarded a Ph.D. in Protein Biochemistry from Johannes Gutenberg University in Mainz, Germany, in 2015, after which he moved to Warwick University in the UK to become a post-doctoral researcher in Synthetic Biology.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Zerfaß, Christian. (2019, July 18). Séparation de Flavinoids des protéines de plasma utilisant UHPLC-MS. News-Medical. Retrieved on September 17, 2019 from https://www.news-medical.net/life-sciences/Separating-Flavinoids-from-Plasma-Proteins-using-UHPLC-MS.aspx.

  • MLA

    Zerfaß, Christian. "Séparation de Flavinoids des protéines de plasma utilisant UHPLC-MS". News-Medical. 17 September 2019. <https://www.news-medical.net/life-sciences/Separating-Flavinoids-from-Plasma-Proteins-using-UHPLC-MS.aspx>.

  • Chicago

    Zerfaß, Christian. "Séparation de Flavinoids des protéines de plasma utilisant UHPLC-MS". News-Medical. https://www.news-medical.net/life-sciences/Separating-Flavinoids-from-Plasma-Proteins-using-UHPLC-MS.aspx. (accessed September 17, 2019).

  • Harvard

    Zerfaß, Christian. 2019. Séparation de Flavinoids des protéines de plasma utilisant UHPLC-MS. News-Medical, viewed 17 September 2019, https://www.news-medical.net/life-sciences/Separating-Flavinoids-from-Plasma-Proteins-using-UHPLC-MS.aspx.

Comments

The opinions expressed here are the views of the writer and do not necessarily reflect the views and opinions of News-Medical.Net.
Post a new comment
Post