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Séparation des cellules de coeur par cytométrie de flux

Le coeur mammifère se compose de différents types de cellules avec différents fonctionnements, qui ne sont pas tous compris en détail. Afin de caractériser la physiologie et le type de lignées cellulaires dans des essais en laboratoire, des méthodes d'extraction de cellules sont exigées.

cellules de coeurCrédit d'image : Kateryna Kon/Shutterstock.com

Dans une publication récente de méthode, les scientifiques de Suisse et la Pologne ont décrit une cellule triant la procédure pour les fibroblastes producteurs de collagène de coeur des coeurs des souris de laboratoire à l'aide de la cellule fluorescence-activée triant (FACS) avec le type-détail de cellules, fluorescent marqués des anticorps.

Cette recherche a été publiée dans les frontières de tourillon en médicament cardiovasculaire.

Vérifier la composition cellulaire du coeur est important pour des santés cardiaques et la maladie de compréhension. En attendant, pas tous les types de cellules ont été encore recensés. Afin de caractériser les cellules en détail, le tissu cardiaque est couramment désagrégé en retirant enzymatiquement la matrice extracellulaire, et en recensant des types de cellules de basé sur intérêt sur différentes bornes de surface de cellules.

Pour les fibroblastes producteurs de collagène, aucune telle borne n'avait été connue. Au lieu de cela, on avait employé la souris transgénique raye en laquelle ces fibroblastes particuliers ont exprimé la protéine fluorescente EGFP. Puisque les fibroblastes avaient été par nature fluorescents, trier de cellules pourrait facilement les différencier d'autres cellules cardiaques, et des fibroblastes pourraient être examinés dans les cultures cellulaires in vitro.

Cependant, dans les lignées cellulaires transgéniques, il y a toujours le potentiel que l'expression non-indigène d'une protéine comme EGFP change la physiologie cellulaire, et les lignées cellulaires non-transgéniques seraient ainsi préférables.

Chercheurs de Suisse et de Pologne, abouties par Assoc. Professeur Gabriela Kania, ont maintenant prouvé que les fibroblastes producteurs de collagène aux coeurs de souris peuvent alternativement être recensés dans la fluorescence - trier activé de cellules (FACS) basé sur étiqueter deux bornes extérieures de cellules avec des anticorps fluorescents.

Recensement des bornes extérieures droites

Les scientifiques ont commencé leur développement de méthode à partir des souris transgéniques avec une marque fluorescente d'EGFP. Le gène pour la protéine d'EGFP a été réglé par un expression-promoteur qui règle naturellement un gène de collagène-production, de ce fait effectuant le préposé du service d'expression d'EGFP pour les fibroblastes producteurs de collagène.

Après avoir recensé les fibroblastes producteurs de collagène, les chercheurs ont vérifié la liaison des différents anticorps qui sont spécifiques pour les protéines extérieures particulières et l'ont recensé que la population cellulaire EGFP-positive était également positive pour la borne gp38 de cellule-surface. De plus, ils ont constaté que les EGFP-positifs, fibroblastes de gp38-positive étaient négatifs pour trois autres bornes extérieures Ter119 appelé, CD45, et CD31.

Comme résultat, les scientifiques avaient recensé le ce les fibroblastes cardiaques producteurs de collagène pour former une seule population en cytométrie de flux avec la fluorescence élevée du gp38 étiquetant, avec la séparation d'autres lignées cellulaires basées sur leur manque de fluorescence des anticorps qui sont spécifiques pour Ter119, CD45, et CD31.

Contrôle physiologique des fibroblastes

Les chercheurs ensuite ont expliqué que des fibroblastes d'isolement par leur méthode de FACS pourraient être pris dans la culture cellulaire in vitro pour des analyses physiologiques. Ici, ils n'ont pas employé une ligne transgénique de souris d'EGFP, mais au lieu une ligne de type sauvage d'isolement avec leur méthode neuve de FACS.

En déterminant des bornes de surface de cellules de ligne-détail de cellules, ils ont expliqué qu'après qu'étendu culture in vitro de la lignée cellulaire d'isolement (4 canalisations), les cellules étaient encore assimilés à leurs cellules d'ancêtre, mais les configurations changées également montrées de quelques bornes extérieures.

Car l'étude écrit la note, leur méthode de FACS pour l'isolement des fibroblastes peut être utile pour l'analyse des coeurs dans des modèles expérimentaux des maladies cardiaques. Car la méthode est efficace pour l'isolement de fibroblaste, et assez facile pour effectuer, elle peut être très utilisée dans les laboratoires normaux et surmonte le besoin de lignes transgéniques de souris où les fibroblastes sont par nature fluorescents.

L'orientation sur les fibroblastes producteurs de collagène est de ce fait d'intérêt particulier, car la formation mal équilibrée du collagène au coeur est l'utilisation de camajor de la cardiopathie, fibrose et la compréhension améliorée des lignées cellulaires de collagène-formation pourrait aider à recenser une approche thérapeutique appropriée contre elle.

Sources

Identification de Stellato M et autres et isolement des fibroblastes cardiaques du coeur adulte de souris utilisant la cytométrie de flux de deux couleurs. Med avant 2019, 6, 105 de Cardiovasc ; DOI : 10.3389/fcvm.2019.00105.

La note d'auteurs que des expériences sur des animaux ont été reconnus par le bureau vétérinaire cantonal de Zurich (Suisse).

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Last Updated: Nov 11, 2019

Christian Zerfaß, Ph.D.

Written by

Christian Zerfaß, Ph.D.

Christian is an enthusiastic life scientist who wants to understand the world around us. He was awarded a Ph.D. in Protein Biochemistry from Johannes Gutenberg University in Mainz, Germany, in 2015, after which he moved to Warwick University in the UK to become a post-doctoral researcher in Synthetic Biology.

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