Separazione di celle del cuore da citometria a flusso

Il cuore mammifero è composto di tipi differenti delle cellule con differenti funzioni, che non sono tutte capite dettagliatamente. Per caratterizzare la fisiologia ed il tipo di linee cellulari nelle prove di laboratorio, i metodi dell'estrazione delle cellule sono richiesti.

celle del cuoreCredito di immagine: Kateryna Kon/Shutterstock.com

In una pubblicazione recente di metodo, gli scienziati dalla Svizzera e la Polonia hanno descritto una cella che ordina la procedura per i fibroblasti producenti collageno del cuore dai cuori dei mouse del laboratorio usando la cella fluorescenza-attivata che ordina (FACS) con la cella tipo-specifica, fluorescente contrassegnati anticorpi.

Questa ricerca è stata pubblicata nelle frontiere del giornale nella medicina cardiovascolare.

Lo studio della composizione cellulare del cuore è importante per la comprensione la salubrità e della malattia cardiache. Nel frattempo, non tutti i tipi delle cellule ancora sono stati identificati. Per caratterizzare dettagliatamente le celle, il tessuto del cuore è disintegrato comunemente enzimaticamente eliminando la matrice extracellulare ed identificando i tipi delle cellule di basati a interesse sugli indicatori differenti della superficie delle cellule.

Per i fibroblasti producenti collageno, nessun tali indicatore era stato conosciuto. Invece, il mouse transgenico allinea era stato usato in cui questi fibroblasti particolari hanno espresso la proteina fluorescente EGFP. Poiché i fibroblasti erano stati inerentemente fluorescenti, l'ordinamento delle cellule potrebbe differenziarli facilmente da altre celle cardiache ed i fibroblasti potrebbero essere esaminati nelle colture cellulari in vitro.

Tuttavia, nelle linee cellulari transgeniche, c'è sempre il potenziale che l'espressione non indigena di una proteina come EGFP cambia la fisiologia cellulare e le linee cellulari non transgeniche sarebbero così preferibili.

Ricercatori dalla Svizzera e dalla Polonia, piombo da Assoc. Il professor Gabriela Kania, ora ha indicato che i fibroblasti producenti collageno nei cuori del mouse possono essere identificati alternativamente nella fluorescenza - l'ordinamento attivato delle cellule (FACS) basato sull'etichettatura dei due indicatori di superficie delle cellule con gli anticorpi fluorescenti.

Identificazione degli indicatori di superficie giusti

Gli scienziati hanno iniziato il loro sviluppo di metodo dai mouse transgenici con un contrassegno fluorescente di EGFP. Il gene per la proteina di EGFP è stato gestito da un espressione-promotore che gestisce naturalmente un gene di collageno-produzione, così facente il rappresentante di espressione di EGFP per i fibroblasti producenti collageno.

Identificando i fibroblasti producenti collageno, i ricercatori hanno provato il legame degli anticorpi differenti che sono specifici per le proteine di superficie particolari ed hanno identificato che la popolazione EGFP-positiva delle cellule era egualmente positiva per l'indicatore gp38 della cella-superficie. Inoltre, hanno trovato che il EGFP-positivi, fibroblasti di gp38-positive erano negativi per altri tre indicatori di superficie chiamati Ter119, CD45 e CD31.

Di conseguenza, gli scienziati avevano identificato il quel fibroblasti cardiaci producenti collageno per formare una popolazione unica in citometria a flusso con l'alta fluorescenza dal gp38 che etichetta, con la separazione da altre linee cellulari basate sulla loro mancanza di fluorescenza dagli anticorpi che sono specifici per Ter119, CD45 e CD31.

Prova fisiologica dei fibroblasti

I ricercatori dopo hanno dimostrato che i fibroblasti isolati con il loro metodo di FACS potrebbero essere catturati in coltura cellulare in vitro per le analisi fisiologiche. Qui, non hanno usato una riga transgenica del mouse di EGFP, ma invece una riga selvaggio tipa isolata con il loro nuovo metodo di FACS.

Provando ad indicatori riga-specifici della superficie delle cellule delle cellule, hanno dimostrato che dopo cultura in vitro estesa della linea cellulare isolata (4 passaggi), le celle erano ancora simili alle loro celle dell'antenato, ma reticoli variabili anche indicati di alcuni indicatori di superficie.

Poichè lo studio crea la nota, il loro metodo di FACS per l'isolamento dei fibroblasti può essere utile per l'analisi dei cuori nei modelli sperimentali delle malattie cardiache. Poichè il metodo è efficiente per isolamento del fibroblasto ed equo facile effettuare, può essere ampiamente usato in laboratori standard e sormonta l'esigenza delle righe transgeniche del mouse in cui i fibroblasti sono inerentemente fluorescenti.

Il fuoco sui fibroblasti producenti collageno è quindi di interesse particolare, poichè la formazione squilibrata di collageno nel cuore è l'uso di camajor della malattia di cuore, fibrosi e la comprensione migliore delle linee cellulari diformazione potrebbe contribuire ad identificare un approccio terapeutico appropriato contro di.

Sorgenti

Identificazione di Stellato m. et al. ed isolamento dei fibroblasti cardiaci dal cuore adulto del mouse facendo uso di una citometria a flusso di due colori. Med fronte 2019, 6, 105 di Cardiovasc; DOI: 10.3389/fcvm.2019.00105.

La nota degli autori che gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dall'ufficio veterinario cantonale di Zurigo (Svizzera).

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Last Updated: Nov 11, 2019

Christian Zerfaß, Ph.D.

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Christian Zerfaß, Ph.D.

Christian is an enthusiastic life scientist who wants to understand the world around us. He was awarded a Ph.D. in Protein Biochemistry from Johannes Gutenberg University in Mainz, Germany, in 2015, after which he moved to Warwick University in the UK to become a post-doctoral researcher in Synthetic Biology.

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