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Separação de pilhas do coração pelo Cytometry de fluxo

O coração mamífero é compor de tipos diferentes da pilha com funções diferentes, que não são todas compreendidas em detalhe. A fim caracterizar a fisiologia e o tipo de linha celular nas análises laboratoriais, os métodos da extracção da pilha são exigidos.

pilhas do coraçãoCrédito de imagem: Kateryna Kon/Shutterstock.com

Em uma publicação recente do método, os cientistas de Suíça e o Polônia descreveram uma pilha que classifica o procedimento para colagénio-produzir fibroblasto do coração dos corações de ratos do laboratório usando a pilha fluorescência-ativada que classifica (FACS) com a pilha tipo-específica, etiquetados fluorescente anticorpos.

Esta pesquisa foi publicada nas fronteiras do jornal na medicina cardiovascular.

Investigar a composição celular do coração é importante para compreender a saúde e a doença cardíacas. Entrementes, não todos os tipos da pilha foram identificados ainda. A fim caracterizar em detalhe as pilhas, o tecido do coração é desintegrado geralmente enzymatically removendo a matriz extracelular, e identificando tipos da pilha de interesse-baseado em marcadores diferentes da superfície da pilha.

Para fibroblasto deprodução, nenhum tal marcador tinha sido sabido. Em lugar de, o rato transgénico alinha tinha sido usado em que estes fibroblasto particulares expressaram a proteína fluorescente EGFP. Desde que os fibroblasto tinham sido inerente fluorescentes, a classificação da pilha poderia facilmente diferenciá-los de outras pilhas cardíacas, e os fibroblasto poderiam ser examinados in vitro em culturas celulares.

Contudo, em linha celular transgénicas, há sempre o potencial que a expressão não-nativa de uma proteína como EGFP muda a fisiologia celular, e as linha celular não-transgénicas seriam assim preferíveis.

Pesquisadores de Suíça e do Polônia, conduzidos por Assoc. O professor Gabriela Kania, tem mostrado agora que os fibroblasto deprodução em corações do rato podem alternativamente ser identificados na fluorescência - classificação ativada da pilha (FACS) baseada em etiquetar dois marcadores de superfície da pilha com os anticorpos fluorescentes.

Identificando os marcadores de superfície direitos

Os cientistas começaram sua revelação do método dos ratos transgénicos com uma etiqueta fluorescente de EGFP. O gene para a proteína de EGFP foi controlado por um expressão-promotor que controlasse naturalmente um gene da colagénio-produção, assim fazendo o representante da expressão de EGFP para fibroblasto deprodução.

Identificando os fibroblasto deprodução, os pesquisadores testaram o emperramento dos anticorpos diferentes que são específicos para proteínas da superfície do detalhe e identificaram-no que a população EGFP-positiva da pilha era igualmente positiva para o marcador gp38 da pilha-superfície. Além, encontraram que os EGFP-positivos, fibroblasto de gp38-positive eram negativos para outros três marcadores de superfície chamados Ter119, CD45, e CD31.

Em conseqüência, os cientistas tinham identificado aquele queproduz fibroblasto cardíacos para formar uma população original no cytometry de fluxo com fluorescência alta do gp38 que etiqueta, com a separação de outras linha celular baseadas em sua falta da fluorescência dos anticorpos que são específicos para Ter119, CD45, e CD31.

Teste fisiológico dos fibroblasto

Os investigador em seguida demonstraram que os fibroblasto isolados por seu método de FACS poderiam ser tomados in vitro na cultura celular para ensaios fisiológicos. Aqui, não usaram uma linha transgénica do rato de EGFP, mas pelo contrário um selvagem-tipo linha isolada com seu método novo de FACS.

Testando para marcadores linha-específicos da superfície da pilha da pilha, demonstraram que após in vitro a cultura estendida da linha celular isolada (4 passagens), as pilhas eram ainda similares a suas pilhas do antepassado, mas os testes padrões mudados igualmente mostrados de algum surgem marcadores.

Porque o estudo é o autor da nota, seu método de FACS para o isolamento dos fibroblasto pode ser útil para a análise dos corações em modelos experimentais de doenças cardíacas. Porque o método é eficiente para o isolamento do fibroblasto, e razoavelmente fácil se realizar, pode ser amplamente utilizado em laboratórios padrão e supera a necessidade para as linhas transgénicas do rato onde os fibroblasto são inerente fluorescentes.

O foco em fibroblasto deprodução é desse modo do interesse particular, como a formação desequilibrada de colagénio no coração é o uso do camajor da doença cardíaca, fibrose e a compreensão melhorada das linha celular deformação poderia ajudar a identificar uma aproximação terapêutica apropriada contra ela.

Fontes

Identificação de Stellato M e outros e isolamento de fibroblasto cardíacos do coração adulto do rato usando o Cytometry de fluxo de duas cores. MED dianteiro 2019 de Cardiovasc, 6, 105; DOI: 10.3389/fcvm.2019.00105.

A nota dos autores que as experiências animais estiveram aprovadas pelo escritório veterinário cantonal de Zurique (Suíça).

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Last Updated: Nov 11, 2019

Christian Zerfaß, Ph.D.

Written by

Christian Zerfaß, Ph.D.

Christian is an enthusiastic life scientist who wants to understand the world around us. He was awarded a Ph.D. in Protein Biochemistry from Johannes Gutenberg University in Mainz, Germany, in 2015, after which he moved to Warwick University in the UK to become a post-doctoral researcher in Synthetic Biology.

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