Separación de células del corazón por Cytometry de flujo

El corazón mamífero se compone de diversos tipos de la célula con diversas funciones, que no son todas entendidas detalladamente. Para caracterizar la fisiología y el tipo de variedades de células en pruebas de laboratorio, los métodos de la extracción de la célula se requieren.

células del corazónHaber de imagen: Kateryna Kon/Shutterstock.com

En una publicación reciente del método, los científicos de Suiza y Polonia han descrito una célula clasificación el procedimiento para colágeno-producir fibroblastos del corazón de los corazones de los ratones del laboratorio usando la célula fluorescencia-activada clasificación (FACS) con la célula tipo-específica, fluorescente etiqueta los anticuerpos.

Esta investigación se ha publicado en las fronteras del gorrón en remedio cardiovascular.

La investigación de la composición celular del corazón es importante para entender salud y enfermedad cardiacas. Mientras tanto, no todos los tipos de la célula todavía se han determinado. Para caracterizar las células detalladamente, el tejido del corazón es desintegrado común enzimático quitando la matriz extracelular, y determinando tipos de la célula de interés-basado en diversos marcadores de la superficie de la célula.

Para los fibroblastos colágeno-que producían, no se había sabido ningunos tales marcadores. En lugar, el ratón transgénico forra había sido utilizado en el cual estos fibroblastos determinados expresaron la proteína fluorescente EGFP. Puesto que los fibroblastos habían sido intrínsecamente fluorescentes, la clasificación de la célula podría distinguirlos fácilmente de otras células cardiacas, y los fibroblastos podrían ser examinados en cultivos celulares ines vitro.

Sin embargo, en variedades de células transgénicas, hay siempre el potencial que la expresión extranjera de una proteína como EGFP cambia la fisiología celular, y las variedades de células no-transgénicas serían así preferibles.

Investigadores de Suiza y de Polonia, llevadas por Assoc. Profesor Gabriela Kania, ahora ha mostrado que los fibroblastos colágeno-que producen en corazones del ratón pueden ser determinados alternativamente en la fluorescencia - clasificación activada de la célula (FACS) basada en marcar dos marcadores superficiales de la célula con etiqueta con los anticuerpos fluorescentes.

Determinar los marcadores superficiales derechos

Los científicos comenzaron su revelado del método de ratones transgénicos con una escritura de la etiqueta fluorescente de EGFP. El gen para la proteína de EGFP fue controlado por un expresión-promotor que controla naturalmente un gen de la colágeno-producción, así haciendo el representante de la expresión de EGFP para los fibroblastos colágeno-que producían.

Determinando los fibroblastos colágeno-que producían, los investigadores probaron el atascamiento de diversos anticuerpos que son específicos para las proteínas superficiales determinadas y lo determinaron que la población EGFP-positiva de la célula era también positiva para el marcador gp38 de la célula-superficie. Además, encontraron que el EGFP-positivos, fibroblastos de gp38-positive eran negativos para tres otros marcadores superficiales llamados Ter119, CD45, y CD31.

Como consecuencia, los científicos habían determinado eso colágeno-que producía fibroblastos cardiacos para formar una población única en cytometry de flujo con alta fluorescencia del gp38 que marcaba con etiqueta, con la separación de otras variedades de células basadas en su falta de fluorescencia de los anticuerpos que son específicos para Ter119, CD45, y CD31.

Prueba fisiológica de fibroblastos

Los investigadores después demostraron que los fibroblastos aislados con su método de FACS podrían ser tomados en el cultivo celular in vitro para los análisis fisiológicos. Aquí, no utilizaron una línea transgénica del ratón de EGFP, sino que por el contrario un salvaje-tipo línea aislada con su nuevo método de FACS.

Probando para los marcadores línea-específicos de la superficie de la célula de la célula, demostraron que después de la cultura in vitro extendida de la variedad de células aislada (4 pasajes), las células eran todavía similar a sus células del antepasado, pero las configuraciones cambiadas también mostradas de algunos marcadores superficiales.

Pues el estudio es autor de la nota, su método de FACS para el aislamiento de fibroblastos puede ser útil para el análisis de corazones en los modelos experimentales de enfermedades cardiacas. Pues el método es eficiente para el aislamiento del fibroblasto, y bastante fácil realizar, puede ser ampliamente utilizado en laboratorios estándar y vence la necesidad de líneas transgénicas del ratón donde están intrínsecamente fluorescentes los fibroblastos.

El foco en fibroblastos colágeno-que producen está de tal modo de interés determinado, como la formación desequilibrada de colágeno en el corazón es el uso del camajor de la enfermedad cardíaca, fibrosis y la comprensión perfeccionada de las variedades de células de colágeno-formación podría ayudar a determinar una aproximación terapéutica apropiada contra ella.

Fuentes

Identificación de Stellato M y otros y aislamiento de fibroblastos cardiacos del corazón adulto del ratón usando Cytometry de flujo bicolor. MED delantero 2019, 6, 105 de Cardiovasc; DOI: 10.3389/fcvm.2019.00105.

La nota de los autores que las experiencias con animales fueron aprobadas por la oficina veterinaria cantonal de Zurich (Suiza).

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Last Updated: Nov 11, 2019

Christian Zerfaß, Ph.D.

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Christian Zerfaß, Ph.D.

Christian is an enthusiastic life scientist who wants to understand the world around us. He was awarded a Ph.D. in Protein Biochemistry from Johannes Gutenberg University in Mainz, Germany, in 2015, after which he moved to Warwick University in the UK to become a post-doctoral researcher in Synthetic Biology.

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