Analyse de formation de tube : une introduction

L'angiogenèse, qui indique le procédé de développer les vaisseaux sanguins neufs de ceux de préexistences, est un événement indispensable pour le développement embryonnaire, l'accroissement d'organe et la cicatrisation. Les vaisseaux sanguins de création récente sont responsables de fournir l'oxygène et des éléments nutritifs à différents tissus, de retirer des produits de déchets et d'introduire le contrôle immunisé.

Parmi le la plupart des détail et tests in vitro bien définis pour l'angiogenèse est l'évaluation de la propension des cellules endothéliales de former les structures 3D (également connues sous le nom de formation de tube). Indépendamment de leur origine, les cellules endothéliales semblent capables former spontanément des tubules, si elles sont équipées de temps suffisant in vitro pour établir les composantes adéquates de matrice extracellulaire.

Principes de l'analyse de formation de tube

L'analyse de formation de tube représente une méthode simple, expéditive et quantitative pour la détermination des gènes ou des différentes voies qui jouent un rôle dans l'angiogenèse. Au commencement décrit en 1988, le principe principal de cette analyse est que les cellules endothéliales préservent la capacité pour se diviser et émigrer rapidement en réponse à certains signes angiogéniques.

Après découverte ce Matrigel (qui est un produit modification modification dérivé des cellules tumorales d'Engelbreth-Holm-Essaim avec le laminin comme composante primaire) peut obtenir la formation du tube de cellule endothéliale dans un délai de 24 heures, ces analyses ont atteint une place remarquable dans notre répertoire de la mesure d'angiogenèse.

La cultivation des cellules endothéliales sur un gel d'extrait de membrane basale (BME) est une voie d'induire leur différenciation et formation comme un tube de structures. Les tubes qui se développent contiennent un lumen encerclés par les cellules endothéliales qui sont jointes ensemble par l'intermédiaire des composés de liaison. Selon la quantité et le type de stimulus, la formation de tube peut se produire vite dans cette analyse, avec la plupart des tubes montrant dans un délai de 2 à 6 heures.

Différents types de cellules endothéliales peuvent être utilisés aux fins de cette analyse - comprenant les lignées cellulaires primaires et immortalisées. Selon le choix, une lignée cellulaire est employée et l'utilisation des cellules endothéliales transformées ou non-transformées, optimisation est souvent nécessaire pour recenser le temps idéal requis pour la formation adéquate de tube.

Obtention des résultats représentatifs

Le choix d'un bon type de cellules pour l'analyse de formation de tube est pivotalement pour obtenir des résultats fiables. Les cellules endothéliales humaines de veine ombilicale (HUVEC) et les cellules endothéliales aortiques humaines (HAEC) sont des cellules normalisées qui sont fournies par la compagnie Fisher thermo scientifique. Quelques lignées cellulaires de tumeur (telles que cancer du sein MDA-MB-435 ou cellules de mélanome B16F1) peuvent également former les tubules vasculaires.

La couche de modification de Matrigel devrait être optimisée par processus de fabrication afin de produire de la surface plane et éliminer le ménisque. Un tel Matrigel est fourni par des biosciences du BD, qui est également examiné pour que sa capacité introduise la formation efficace de tube.

Le comptage cellulaire a un choc considérable sur la formation de tube, comme avec plus de cellules le réseau de tube qui peut être obtenu devient plus considérable. Cependant, la densité de injection de cellules devrait également être tenue compte, parce que la forte concentration peut avoir comme conséquence le groupement de cellules ou la formation de couche unitaire, ainsi toutes les variations entre les groupes de demande de règlement peuvent devenir masquées. La densité de injection optimale est approximativement 5 mille cellules par cm2.

Par conséquent les systèmes normalisés peuvent de manière significative faciliter en obtenant les meilleurs résultats. Par exemple, le nécessaire de formation de tube du système HT d'angiogenèse de Cultrex, fourni par AMSBIO, permet le dépistage facile des inducteurs et des inhibiteurs de formation de tube de cellules, et adapte également à 96 analyses bonnes de format.

Des images peuvent être documentées par l'intermédiaire de la microscopie de contraste de phase en utilisant des objectifs l'agrandissement entre 4 et 20 moments. Cependant, si des images fluorescentes sont exigées, une calcéine cellule-permeant AM de teinture peut être ajoutée et le réseau endothélial de tube être conçue à l'aide de la fluorescence ou de la microscopie confocale. De telles cellules souillées de HUVEC peuvent être également trouvées utilisant la représentation effondrée confocale de pile fournie par des biosciences du BD.

En conclusion, les avantages de l'analyse de formation de tube sont période facile et courte de culture, ainsi que possibilité d'analyse de quantification et de haut-débit. D'autre part, le désavantage principal est une grande variation de capacité de tube-formation parmi un bon nombre variés de cellules endothéliales et de modifications. En conclusion, tous les résultats devraient être confirmés in vivo.

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Last Updated: Aug 23, 2018

Dr. Tomislav Meštrović

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Dr. Tomislav Meštrović

Dr. Tomislav Meštrović is a medical doctor (MD) with a Ph.D. in biomedical and health sciences, specialist in the field of clinical microbiology, and an Assistant Professor at Croatia's youngest university - University North. In addition to his interest in clinical, research and lecturing activities, his immense passion for medical writing and scientific communication goes back to his student days. He enjoys contributing back to the community. In his spare time, Tomislav is a movie buff and an avid traveler.

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Comments

  1. Lie Sian Yap Lie Sian Yap Taiwan says:

    Dear Dr. Tomislav Meštrović,

    I want to know why the formation of endothelial cell tube within 24 hours, and after 24 hours the tube started to decrease?  Thank you

The opinions expressed here are the views of the writer and do not necessarily reflect the views and opinions of News-Medical.Net.
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