Análisis de la formación del tubo: una introducción

El Angiogenesis, que denota el proceso de desarrollar los nuevos vasos sanguíneos los preexistencias, es una acción vital para el revelado embrionario, incremento del órgano e hiere la cura. Los vasos sanguíneos creados recientemente son responsables de suministrar el oxígeno y los alimentos a diversos tejidos, de quitar los residuos y de ascender vigilancia inmune.

Entre las pruebas ines vitro más específicas y más bien definidas para el angiogenesis es la evaluación de la propensión de células endoteliales a formar las estructuras 3D (también conocidas como formación del tubo). Sin importar su origen, las células endoteliales parecen capaces de formar espontáneamente los túbulos, si se proporcionan el suficiente tiempo in vitro para colocar componentes extracelulares adecuados de la matriz.

Principios del análisis de la formación del tubo

El análisis de la formación del tubo representa un método simple, expeditivo y cuantitativo para la determinación de los genes o de diversos caminos que desempeñan un papel en angiogenesis. Descrito inicialmente en 1988, el principio fundamental de este análisis es que las células endoteliales preservan la capacidad para dividir y para emigrar rápidamente en respuesta a ciertas señales angiogénicas.

Después de descubrir ese Matrigel (que es un producto matriz-rico derivado de las células del tumor del Engelbreth-Encina-Enjambre con el laminin como componente primario) puede sacar la formación de tubo endotelial de la célula en el plazo de 24 horas, estos análisis ha logrado un lugar significativo en nuestro repertorio de la medición del angiogenesis.

Cultivar las células endoteliales en un gel del extracto de la membrana del sótano (BME) es una manera de inducir su diferenciación y tubo-como la formación de las estructuras. Los tubos que se convierten contienen un lumen cercados por las células endoteliales que se ensamblan juntas vía complejos junctional. Dependiendo de la cantidad y del tipo de estímulos, la formación del tubo puede ocurrir rápidamente en este análisis, con la mayoría de los tubos mostrando en el plazo de 2 a 6 horas.

Diversos tipos de células endoteliales se pueden utilizar con el propósito de este análisis - incluyendo variedades de células primarias y inmortalizadas. Dependiendo de la opción, se utiliza una variedad de células y el uso de las células endoteliales transformadas o no-transformadas, optimización es a menudo necesario determinar el tiempo ideal requerido para la formación adecuada del tubo.

Obtención de resultados representativos

La opción de un tipo correcto de la célula para el análisis de la formación del tubo es giratoria para obtener resultados seguros. Las células endoteliales humanas de la vena umbilical (HUVEC) y las células endoteliales aórticas humanas (HAEC) son las células estandardizadas que están disponibles de la compañía Fisher termo científico. Algunas variedades de células del tumor (tales como cáncer de pecho MDA-MB-435 o células del melanoma B16F1) pueden también formar los túbulos vasculares.

La capa de la matriz de Matrigel se debe optimizar por proceso de fabricación para generar la superficie plana y eliminar el menisco. Tal Matrigel está disponible de las ciencia biológicas de BD, que también se revisa para que su capacidad ascienda la formación eficiente del tubo.

El recuento celular tiene un impacto sustancial en la formación del tubo, como con más células la red del tubo que puede ser obtenida llega a ser más extensa. Sin embargo, la densidad sembrada de la célula debe también ser tenida en cuenta, porque la alta concentración puede dar lugar a agrupar de la célula o a la formación de la capa monomolecular, así cualquier variación entre los grupos del tratamiento puede encubrirse. La densidad sembrada óptima es aproximadamente 5 mil células por cm2s.

Los sistemas por lo tanto estandardizados pueden ayudar importante en la obtención de los mejores resultados. Por ejemplo, el estuche de la formación del tubo del sistema HT del Angiogenesis de Cultrex, disponible de AMSBIO, permite la detección fácil de inductores y de inhibidores de la formación del tubo de la célula, y también se adapta a 96 análisis bien del formato.

Las imágenes se pueden documentar vía microscopia del contraste de la fase empleando objetivos entre el aumento de 4 y 20 veces. Sin embargo, si se requieren las imágenes fluorescentes, una calceína célula-permeant del tinte se puede ser agregada y la red endotelial del tubo visualizar usando fluorescencia o microscopia confocal. Tales células manchadas de HUVEC se pueden también descubrir usando la proyección de imagen desplomada confocal de la pila disponible de las ciencia biológicas de BD.

En conclusión, las ventajas del análisis de la formación del tubo son período fácil y corto de la cultura, así como posibilidad del análisis de la cuantificación y de la alto-producción. Por otra parte, la desventaja principal es una variación grande de la capacidad de tubo-formación entre los diversos lotes de células y de matrices endoteliales. Finalmente, todos los resultados se deben confirmar in vivo.

Fuentes

  1. http://www.clinchem.org/content/49/1/32.full
  2. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4540586/
  3. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3230200/
  4. http://www.amsbio.com/presentation/CAS_Tube_Formation_Assay.pdf
  5. http://www.bdbiosciences.com/documents/webinar_2010_05_angiogenesis.pdf
  6. https://www.thermofisher.com/hr/en/home/references/protocols/cell-and-tissue-analysis/cell-profilteration-assay-protocols/angiogenesis-protocols/endothelial-cell-tube-formation-assay.html

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Last Updated: Aug 23, 2018

Dr. Tomislav Meštrović

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Dr. Tomislav Meštrović

Dr. Tomislav Meštrović is a medical doctor (MD) with a Ph.D. in biomedical and health sciences, specialist in the field of clinical microbiology, and an Assistant Professor at Croatia's youngest university - University North. In addition to his interest in clinical, research and lecturing activities, his immense passion for medical writing and scientific communication goes back to his student days. He enjoys contributing back to the community. In his spare time, Tomislav is a movie buff and an avid traveler.

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Comments

  1. Lie Sian Yap Lie Sian Yap Taiwan says:

    Dear Dr. Tomislav Meštrović,

    I want to know why the formation of endothelial cell tube within 24 hours, and after 24 hours the tube started to decrease?  Thank you

The opinions expressed here are the views of the writer and do not necessarily reflect the views and opinions of News-Medical.Net.
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