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Fluorochromes de compréhension pour l'usage en cytométrie de flux

La cytométrie de flux est une méthode populaire de laboratoire de biologie cellulaire. Elle utilise un laser pour l'analyse, la quantification, et trier rapides d'une suspension des cellules sous tension. Dans une question des nanosecondes, des profils des propriétés de la population cellulaire sont acquis, y compris la taille et la granulation. Ceci est basé sur la configuration caractéristique de la lumière réfractée des cellules. Il est alors possible d'épurer la population cellulaire en les triant dans les glissières distinctes selon leurs propriétés distinctes.

Des fluorochromes sont employés pour un certain nombre dKarl Dupont | Shutterstock

Quand une enquête plus en profondeur sur une population cellulaire est exigée, des anticorps étiquetés avec les teintures fluorescentes sont employés pour recenser la présence ou l'absence des marqueurs cellulaires particuliers. Trouver les protéines spécifiques (telles que les bornes CD) dans une population cellulaire peut aider à déterminer des types de cellules, et ceci est connu comme immunophénotypage.

Quels sont des fluorochromes ?

Des bornes fluorescentes sont connues comme fluorochromes, un terme qui est employé l'un pour l'autre avec fluorophore. Sur l'absorption de la lumière d'un laser, elles deviennent ` excité' et émettent la lumière à une plus longue longueur d'onde pour retourner à leur' condition d'énergie meulée par ` originel, qui est connue comme fluorescence.

Chaque fluorochrome absorbe et émet la lumière à une gamme spécifique des longueurs d'onde. La longueur d'onde émise et plus longue de la lumière est idéalement une couleur différente au laser pour le dépistage facile de la fluorescence. Par exemple, le fluorochrome le plus très utilisé, isothiocyanate de fluorescéine (FITC), a une absorbance maximale de 494nm et une émission maximale de 512nm correspondant aux couleurs bleues et vertes.

Les fluorochromes passionnants à leur absorbance maximale (plutôt qu'à l'extrémité inférieure de leur spectre d'absorbance), active une émission légère plus forte. Bien que les fluorochromes aient les spectres spécifiques de longueur d'onde, ils superposent souvent. Par conséquent, en employant les fluorochromes multiples, il est important de choisir ceux qui sont non-recouverts. Ceci permet la différenciation des caractéristiques de cellules qu'ils mettent en valeur.

Charge la commande des vitesses

Un autre aspect important pour considérer quand le choix d'un fluorochrome est charge la commande des vitesses : la différence entre la longueur d'onde du photon passionnant (le laser) et du photon d'émission (de la cellule brillante par fluorescence). Il charge la commande des vitesses est désirable distinguer un grand les différentes couleurs des photons excitants et émettants.

Teintures tandem

Des teintures tandem sont effectuées en grippant en covalence deux fluorochromes différents. On va bien au donneur et à l'autre un accepteur. Le donneur est ` excité' et émet la lumière qui est absorbée par l'accepteur, due au transfert d'énergie de résonance de fluorescence (FRET). Pour que ceci se produise, les deux fluorochromes exigent l'émission superposante/spectres d'absorption.

Un avantage de cette méthode est qu'il des accroissements plus ultérieurs charge la commande des vitesses pour des couleurs plus perceptibles. Il active l'utilisation de plusieurs fluorochromes dans une Commission, produisant beaucoup de couleurs pour analyser des paramètres multiples. Une limitation des teintures tandem est qu'ils sont extrêmement sensibles et dégradent facilement, particulièrement une fois exposé à la lumière, ayant pour résultat la fluorescence réduite. Il est également nécessaire de surveiller l'environnement de pH de tous les fluorochromes, car les niveaux différents de pH changent leur brilliance.

Points de Quantum

Les petits nanocrystals (2-20 nanomètre), connus sous le nom de tranche de temps pointille, est une alternative aux fluorochromes. La longueur d'onde émise dépend de la taille du point de tranche de temps. Ils ont des spectres d'émission beaucoup plus étroits comparés aux fluorochromes normaux, réduisant la possibilité de couleurs superposantes quand le multiple doit être employé.

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Last Updated: Jul 12, 2019

Stephanie Hunter

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Stephanie Hunter

Stephanie obtained a first-class honors degree in Biomedical Science from the University of Sheffield in 2017. The modules she studied included: cell biology, membrane receptors, stem cells, tissue engineering, cancer, physiology, anatomy, and pharmacology. During her final year, she wrote a literature review on ‘Cell Therapy in Curing Muscular Dystrophy’, in which she analyzed different cell types with different genetic manipulations for their potential use in cell therapy.

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