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Fluorocromi di comprensione per uso in citometria a flusso

La citometria a flusso è un metodo popolare del laboratorio di biologia cellulare. Utilizza un laser per l'analisi, la quantificazione e l'ordinamento rapidi di una sospensione delle celle in tensione. In un aspetto dei nanosecondi, i profili dei beni della popolazione delle cellule si acquistano, compreso la dimensione e la granulazione. Ciò è basata sul reticolo caratteristico di indicatore luminoso rifranto dalle celle. È poi possibile depurare la popolazione delle cellule ordinandole nei canali distinti secondo i loro beni distinti.

I fluorocromi sono usati per una serie di applicazioni. Qui, gli indicatori delle cellule sono stati evidenziati con un indicatore fluorescente (un fluorocromo).Carl Du Pont | Shutterstock

Quando un'indagine più approfondita su una popolazione delle cellule è richiesta, gli anticorpi etichettati con le tinture fluorescenti sono usati per identificare la presenza o l'assenza di indicatori cellulari particolari. La rilevazione delle proteine specifiche (quali gli indicatori del CD) in una popolazione delle cellule può contribuire a determinare i tipi delle cellule e questa è conosciuta come immunophenotyping.

Che cosa sono fluorocromi?

Gli indicatori fluorescenti sono conosciuti come fluorocromi, un termine che è usato scambievolmente con fluorophore. Sopra assorbimento di indicatore luminoso da un laser, si trasformano in in ` eccitato' ed emettono l'indicatore luminoso ad una lunghezza d'onda più lunga per ritornare al loro' stato di energia macinato ` originale, che è conosciuto come fluorescenza.

Ogni fluorocromo assorbe ed emette l'indicatore luminoso ad un intervallo specifico delle lunghezze d'onda. La lunghezza d'onda emessa e più lunga di indicatore luminoso è idealmente un colore differente al laser per rilevazione facile della fluorescenza. Per esempio, il fluorocromo più ampiamente usato, isotiocianato di fluorescina (FITC), ha una capacità di assorbimento di punta di 494nm e un'emissione di punta di 512nm che corrisponde ai colori blu e verdi.

I fluorocromi emozionanti alla loro capacità di assorbimento di punta (piuttosto che alla conclusione inferiore del loro spettro di capacità di assorbimento), permette all'emissione di luce più intensa. Sebbene i fluorocromi abbiano spettri specifici di lunghezza d'onda, stanno sovrapponendo spesso. Di conseguenza quando usando i fluorocromi multipli, è importante scegliere quelli che sono non sovrapponibili. Ciò permette la differenziazione delle funzionalità che delle cellule stanno evidenziando.

Rifornisce lo spostamento

Un altro aspetto importante per considerare quando scegliere un fluorocromo è rifornisce lo spostamento: la differenza fra la lunghezza d'onda del fotone emozionante (il laser) e del fotone dell'emissione (dalla cella stante flourescente). Un grande rifornisce lo spostamento è desiderabile da distinguere fra i colori differenti dei fotoni emozionanti e d'emissioni.

Tinture in tandem

Le tinture in tandem sono fatte in covalenza legando due fluorocromi differenti. Uno sta bene al donatore ed all'altro un ricettore. Il donatore è ` eccitato' ed emette l'indicatore luminoso che è assorbito dal ricettore, dovuto il trasferimento di energia di risonanza della fluorescenza (FRET). Affinchè questo accadano, i due fluorocromi richiedono l'emissione di sovrapposizione/spettri di assorbimento.

Un vantaggio di questo metodo è che accrescimenti più ulteriori rifornisce lo spostamento per i colori più distinguibili. Permette all'uso di parecchi fluorocromi in un comitato, producendo molti colori per analizzare i parametri multipli. Una limitazione delle tinture in tandem è che sono altamente sensibili e si degradano facilmente, particolarmente una volta esposto ad indicatore luminoso, con conseguente fluorescenza diminuita. È necessario egualmente da riflettere l'ambiente di pH di tutti i fluorocromi, poichè i livelli differenti di pH cambiano la loro luminosità.

Punti di Quantum

I piccoli nanocrystals (2-20 nanometro), conosciuti come il quantum punteggia, sono un'alternativa ai fluorocromi. La lunghezza d'onda emessa dipende dalla dimensione del punto di quantum. Hanno spettri di emissione molto più stretti confrontati ai fluorocromi standard, diminuenti la probabilità dei colori di sovrapposizione quando il multiplo deve essere usato.

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Last Updated: Jul 12, 2019

Stephanie Hunter

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Stephanie Hunter

Stephanie obtained a first-class honors degree in Biomedical Science from the University of Sheffield in 2017. The modules she studied included: cell biology, membrane receptors, stem cells, tissue engineering, cancer, physiology, anatomy, and pharmacology. During her final year, she wrote a literature review on ‘Cell Therapy in Curing Muscular Dystrophy’, in which she analyzed different cell types with different genetic manipulations for their potential use in cell therapy.

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