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Fluorocromos de comprensión para el uso en Cytometry de flujo

El cytometry de flujo es un método popular del laboratorio de biología celular. Utiliza un laser para el análisis, la cuantificación, y la clasificación rápidos de una suspensión de células vivas. En una cuestión de nanosegundos, los perfiles de las propiedades de la población de la célula se detectan, incluyendo talla y la granulación. Esto se basa en la configuración característica de la luz refractada de las células. Es entonces posible purificar la población de la célula clasificación las en los canales distintos dependiendo de sus propiedades distintas.

Los fluorocromos se utilizan para varios usos. Aquí, los marcadores de la célula se han destacado con un marcador fluorescente (un fluorocromo).Carl Du Pont | Shutterstock

Cuando una investigación más profundizada de una población de la célula se requiere, los anticuerpos marcados con etiqueta con los tintes fluorescentes se utilizan para determinar la presencia o la ausencia de marcadores celulares determinados. Descubrir las proteínas específicas (tales como marcadores del CD) en una población de la célula puede ayudar a determinar tipos de la célula, y esto se conoce como immunophenotyping.

¿Cuáles son fluorocromos?

Los marcadores fluorescentes se conocen como fluorocromos, un término que se utilice alternativamente con fluoróforo. Sobre la amortiguación de la luz de un laser, se convierten en ` emocionado' y emiten la luz en una longitud de onda más larga para volver a su' estado de energía esmerilado ` original, que se conoce como fluorescencia.

Cada fluorocromo absorbe y emite la luz en un alcance específico de longitudes de onda. La longitud de onda emitida, más larga de la luz es idealmente un diverso color al laser para la detección fácil de la fluorescencia. Por ejemplo, el fluorocromo más ampliamente utilizado, isotiocianato de fluoresceína (FITC), tiene una absorción máxima de 494nm y una emisión máxima de 512nm correspondiente a los colores azules y verdes.

Los fluorocromos emocionantes en su absorción máxima (bastante que en el final inferior de su espectro de la absorción), habilitan una emisión liviana más intensa. Aunque los fluorocromos tengan espectros específicos de la longitud de onda, están recubriendo a menudo. Por lo tanto, al usar los fluorocromos múltiples, es importante elegir los que sean sin traslapo. Esto permite la diferenciación de las características de la célula que están destacando.

Alimenta el movimiento

Otro aspecto importante para considerar cuando elegir un fluorocromo es alimenta el movimiento: la diferencia entre la longitud de onda del fotón emocionante (el laser) y del fotón de la emisión (de la célula que es fluorescente). Un grande alimenta el movimiento es deseable de distinguir entre los diversos colores de los fotones emocionantes y de emisiones.

Tintes en tándem

Los tintes en tándem son hechos covalente atando dos diversos fluorocromos. Uno siente bien al donante y al otro un aceptor. El donante es ` emocionado' y emite la luz que es absorbida por el aceptor, debido a la transferencia de energía de resonancia de la fluorescencia (FRET). Para que esto ocurra, los dos fluorocromos requieren la emisión que recubre/espectros de amortiguación.

Una ventaja de este método es que aumentos posteriores alimenta el movimiento para colores más distinguibles. Habilita el uso de varios fluorocromos en un panel, produciendo muchos colores para analizar parámetros múltiples. Una limitación de tintes en tándem es que son altamente sensibles y degradan fácilmente, especialmente cuando está expuesto a la luz, dando por resultado fluorescencia reducida. Es también necesario vigilar el ambiente del pH de todos los fluorocromos, pues los niveles del pH que difieren cambian su luminosidad.

Puntos de Quantum

Los pequeños nanocrystals (2-20 nanómetro), conocidos como quantum puntean, son una opción a los fluorocromos. La longitud de onda emitida depende de la talla del punto del quantum. Tienen espectros de emisión mucho más estrechos comparados a los fluorocromos estándar, reduciendo la ocasión de colores que recubren cuando el múltiplo debe ser utilizado.

Fuentes

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Last Updated: Jul 12, 2019

Stephanie Hunter

Written by

Stephanie Hunter

Stephanie obtained a first-class honors degree in Biomedical Science from the University of Sheffield in 2017. The modules she studied included: cell biology, membrane receptors, stem cells, tissue engineering, cancer, physiology, anatomy, and pharmacology. During her final year, she wrote a literature review on ‘Cell Therapy in Curing Muscular Dystrophy’, in which she analyzed different cell types with different genetic manipulations for their potential use in cell therapy.

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