Usos da interferência curto do RNA do gancho de cabelo (shRNA)

A interferência do RNA refere o silêncio ou a batida para baixo de um gene do alvo degradando seu mRNA correspondente usando RNAs de interferência pequeno (siRNA) ou o RNA curto do gancho de cabelo (shRNA).

Complexo do RISC - pelo molekuul_bemolekuul_be | Shutterstock

Conseguindo o silêncio prolongado do gene

As seqüências curtos do gancho de cabelo são codificadas dentro de um vector do ADN e de umas pilhas internas então introduzidas usando o transfection do plasmídeo ou a transdução viral. O RNA curto do gancho de cabelo pode estar na empresa do laço simples da haste ou de um shRNA microRNA-adaptado.

O haste-laço consiste em 19-29 basepairs do RNA dobro-encalhado que é construído uma ponte sobre pelo RNA único-encalhado. O laço simples da haste e o shRNA adaptado microRNA- são transcritos no núcleo. Junto com as seqüências do alvo, outras moléculas do repórter, tais como proteínas fluorescentes podem igualmente ser incluídas nas gavetas para seguir as pilhas que expressam o shRNA.

Em cima de incorporar as pilhas, o shRNA é processado por Drosha, uma enzima do ribonuclease. O produto final então é exportado fora do núcleo, processado por Dicer (uma enzima do RNAse) e incorporado no complexo (RISC) de silêncio RNA-induzido. Subseqüentemente, o mRNA é fendido pelo RISC que conduz à supressão da expressão - assim, o silêncio prolongado do gene pode ser conseguido pelo RNA curto do gancho de cabelo.

Usando o shRNA em terapias do gene e do cancro

Os genes do alvo de Downregulating que usam o RNA curto do gancho de cabelo oferecem uma estratégia nova para a terapia genética. Os vários in vitro estudos mostraram o uso prometedor de RNAi aos cancros do deleite. As características chaves de pilhas malignos são crescimento descontrolado e caminhos alterados da morte celular. As células cancerosas podem igualmente mostrar o crescimento invasor, destruindo as pilhas e os tecidos circunvizinhos.

Estes comportamentos são causados por caminhos alterados da expressão genética e da sinalização. Assim, visar os genes que são componentes críticos de um caminho da sinalização pode formar um método poderoso para visar o cancro. Presentemente, os estudos visaram os genes que são envolvidos na morte celular, no regulamento do ciclo de pilha, na transdução do sinal, e em outros genes cancro-relacionados (tais como o telomerase, a sintase do ácido gordo, etc.).

Compreendendo o pulso de disparo circadiano

Os ritmos circadianos estam presente na fisiologia, metabolismo, comportamento e são existentes em uma vasta gama de organismos: do cyanobacteria aos seres humanos. Estes pulsos de disparo fornecem estes organismos um sentido interno do tempo.

Independentemente do cérebro, a maquinaria para o pulso de disparo circadiano está igualmente actual em diversas outras pilhas do corpo. Recentemente, diversas telas RNAi-baseadas foram usadas para compreender o mecanismo atrás das oscilações circadianos. Isto foi feito pela batida para baixo conhecida e os genes previstos envolvidos em ritmos circadianos e então pela avaliação do efeito em oscilações.

Descobrindo alvos novos do VIH

A síndrome imune adquirido da deficiência (AIDS) continua a ser um dos recuos humanos principais da charneca, e embora as terapias sejam planejadas para prolongar a vida e a saúde de pacientes VIH-contaminados, ainda permanece um dos problemas de saúde os mais grandes no mundo moderno.

O vírus de imunodeficiência humana (HIV) igualmente trabalha em uma maneira interessante onde capture a maquinaria do anfitrião para promover sua réplica. Assim, há uma necessidade de identificar mais todas as proteínas que são involvidas em processo da infecção pelo HIV descobrir uns alvos terapêuticos mais poderosos.

Uma das maneiras que esta está sendo feita é usando o método do shRNA para silenciar os genes específicos que são sabidos ou previstos para ser uma parte do processo da infecção pelo HIV. Após ter suprimido os genes, os efeitos na infecção pelo HIV e o caminho podem ser analisados para confirmar o papel daqueles genes. Assim, esta estratégia pode trazer adiante possibilidades para umas terapias antivirosas mais novas.

Independentemente destes efeitos, a estratégia do shRNA está sendo usada igualmente para compreender e sondar outros processos, tais como a migração da pilha, epitelial à migração mesenchymal (isto é um outro indicador do cancro), aos caminhos da migração da pilha, assim como a outros caminhos relativos doença. Independentemente in vitro dos estudos, RNAi está sendo estendido igualmente para compreender in vivo estes processos nos modelos animais.

Fontes

Further Reading

Last Updated: Jan 22, 2019

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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