Facendo uso dell'elettroporazione per trasformare i batteri, protoplasti dell'impianto e del lievito

L'elettroporazione è una tecnologia usata per aumentare la permeabilità delle membrane cellulari. È usata per incitare le celle a prendere varie sostanze, compreso i prodotti chimici, le droghe ed il DNA.

Credito: Rattiya Thongdumhyu/Shutterstock.com

Quando le celle prendono il DNA, il trattamento è conosciuto come trasformazione. I batteri, il lievito ed i protoplasti dell'impianto possono essere trasformati facendo uso dell'elettroporazione.

Che cosa è un electroporator?

Un electroporator è un'unità che tiene la sospensione delle cellule mentre la tensione è applicata. La sospensione delle cellule è messa in un contenitore specializzato, o nella provetta, con due elettrodi di alluminio da qualsiasi lato. Gli elettrodi devono entr inare contatto con la sospensione delle cellule.

L'elettroporazione piombo alla formazione di pori all'interno della membrana cellulare. Gli impulsi elettrici, intorno a 0.5-1V, sono applicati attraverso la membrana, fungente da condensatore per migrazione degli ioni dalla soluzione. Ciò induce una riorganizzazione della struttura del lipido della membrana, in primo luogo formante un pre-poro, quindi un poro conduttivo attraverso cui il DNA può passare.

Batteri

La trasformazione dei batteri comprende solitamente l'uso dei plasmidi. I plasmidi sono costruzioni circolari del DNA che possono portare i geni da clonare ed altre funzioni desiderate per l'espressione della proteina. Una corrente è passata attraverso le celle sospese che contengono il DNA del plasmide in una provetta. Alle celle poi sono permesse svilupparsi e dividersi, riproducendo la costruzione del DNA.

In un protocollo tipico di elettroporazione, una trasformazione positiva di controllo inizialmente è effettuata facendo uso del DNA non tagliato del plasmide e di un controllo negativo senza DNA. Il plasmide contiene un fattore di selezione, quale resistenza a antibiotici, che permette che le celle risultanti siano schermate. Il campione di controllo positivo dovrebbe svilupparsi ed il campione di controllo negativo dovrebbe non mostrare la crescita.

Le cellule ospiti compatibili sono scelte che hanno i beni desiderati per la trasformazione. L'elettroporazione è effettuata con i campioni sperimentali. Se riuscita, la costruzione desiderata del DNA può essere raccolta dalle celle.

Lievito

Le celle di lievito hanno limitato tipicamente il risparmio di temi di trasformazione. Un protocollo per trasformazione ottimizzata del lievito comprende una combinazione di acetato del litio e di dithiothreitol (LiAc/SS) come agenti di condizionamento delle cellule. Questi prodotti chimici migliorano la trasformazione del lievito dall'elettroporazione.

I ricercatori cloruro anche incluso di calcio e del sorbitolo nel buffer di elettroporazione. Questi cambiamenti hanno provocato il volume aumentato delle cellule che può contribuire al risultato di più alto risparmio di temi di trasformazione. Le quantità aumentanti di DNA egualmente hanno provocato il risparmio di temi aumentato di trasformazione.

Un altro protocollo di trasformazione del lievito richiede l'uso di LiAc/SS come pure la scossa del calore. Un impulso ad alta tensione è amministrato durante l'elettroporazione alle celle di lievito che sono state il calore colpito in presenza del DNA unico incagliato dei portafili, DNA del plasmide e polietilene glicole (PARITÀ). Il protocollo può essere completato in 30 minuti.

Protoplasti dell'impianto

Gli impianti dell'arancia dolce (C.sinensis) possono essere rigenerati dai protoplasti del callo embryogenic dell'impianto. Questo tratto è stato sfruttato per produrre i numerosi ibridi.

I ricercatori hanno ottimizzato il risparmio di temi di elettroporazione dei protoplasti derivati da una linea cellulare embryogenic di arancia dolce, prima che electroporated loro in presenza delle costruzioni destinate per produrre gli impianti fluorescenti.

Successivamente, hanno rigenerato i calli protoplasto-derivati negli impianti. Ciò funziona dimostra l'utilità e la versatilità della tecnica di elettroporazione in protoplasti dell'impianto.

Sorgenti:

Further Reading

Last Updated: Feb 26, 2019

Dr. Catherine Shaffer

Written by

Dr. Catherine Shaffer

Catherine Shaffer is a freelance science and health writer from Michigan. She has written for a wide variety of trade and consumer publications on life sciences topics, particularly in the area of drug discovery and development. She holds a Ph.D. in Biological Chemistry and began her career as a laboratory researcher before transitioning to science writing. She also writes and publishes fiction, and in her free time enjoys yoga, biking, and taking care of her pets.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Shaffer, Catherine. (2019, February 26). Facendo uso dell'elettroporazione per trasformare i batteri, protoplasti dell'impianto e del lievito. News-Medical. Retrieved on February 24, 2020 from https://www.news-medical.net/life-sciences/Using-Electroporation-to-Transform-Bacteria-Yeast-and-Plant-Protoplasts.aspx.

  • MLA

    Shaffer, Catherine. "Facendo uso dell'elettroporazione per trasformare i batteri, protoplasti dell'impianto e del lievito". News-Medical. 24 February 2020. <https://www.news-medical.net/life-sciences/Using-Electroporation-to-Transform-Bacteria-Yeast-and-Plant-Protoplasts.aspx>.

  • Chicago

    Shaffer, Catherine. "Facendo uso dell'elettroporazione per trasformare i batteri, protoplasti dell'impianto e del lievito". News-Medical. https://www.news-medical.net/life-sciences/Using-Electroporation-to-Transform-Bacteria-Yeast-and-Plant-Protoplasts.aspx. (accessed February 24, 2020).

  • Harvard

    Shaffer, Catherine. 2019. Facendo uso dell'elettroporazione per trasformare i batteri, protoplasti dell'impianto e del lievito. News-Medical, viewed 24 February 2020, https://www.news-medical.net/life-sciences/Using-Electroporation-to-Transform-Bacteria-Yeast-and-Plant-Protoplasts.aspx.

Comments

The opinions expressed here are the views of the writer and do not necessarily reflect the views and opinions of News-Medical.Net.