Usando la electroporación para transformar bacterias, protoplastos de la levadura y de la instalación

La electroporación es una tecnología usada para aumentar la permeabilidad de las membranas celulares. Se utiliza para inducir a las células que tomen una variedad de substancias, incluyendo las substancias químicas, las drogas, y la DNA.

Haber: Rattiya Thongdumhyu/Shutterstock.com

Cuando las células toman la DNA, el proceso se conoce como transformación. Las bacterias, la levadura, y los protoplastos de la instalación pueden ser transformados usando la electroporación.

¿Cuál es un electroporator?

Un electroporator es un dispositivo que lleva a cabo la suspensión de la célula mientras que el voltaje es aplicado. La suspensión de la célula se pone en un contenedor especializado, o la cubeta, con dos electrodos de aluminio por ambas partes. Los electrodos deben entrar en el contacto con la suspensión de la célula.

La electroporación lleva a la formación de poros dentro de la membrana celular. Los pulsos eléctricos, alrededor de 0.5-1V, son aplicados a través de la membrana, actuando como capacitor para la migración de iones de la solución. Esto induce un cambio de la estructura del lípido de la membrana, primero formando un pre-poro, después un poro conductor a través de los cuales la DNA pueda pasar.

Bacterias

La transformación de bacterias implica generalmente el uso de plásmidos. Los plásmidos son las construcciones circulares de la DNA que pueden llevar los genes que se reproducirán y otras funciones deseadas para la expresión de la proteína. Una corriente se pasa a través de las células suspendidas que contienen la DNA del plásmido en una cubeta. Las células entonces se permiten crecer y dividir, reproduciendo la construcción de la DNA.

En un protocolo típico de la electroporación, una transformación positiva del mando se realiza inicialmente usando la DNA sin cortar del plásmido, y un mando negativo sin la DNA. El plásmido contiene un factor de la selección, tal como resistencia antibiótico, que permite que las células resultantes sean revisadas. La muestra de mando positiva debe crecer y la muestra de mando negativa debe mostrar el crecimiento nulo.

Se eligen las células huesped compatibles que tienen las propiedades deseadas para la transformación. La electroporación se realiza con las muestras experimentales. Si es acertada, la construcción deseada de la DNA se puede cosechar de las células.

Levadura

Las células de levadura han limitado típicamente eficiencia de la transformación. Un protocolo para la transformación optimizada de la levadura incluye una combinación del acetato y del dithiothreitol (LiAc/SS) del litio como agentes de condicionamiento de la célula. Estas substancias químicas aumentan la transformación de la levadura por la electroporación.

Los investigadores también incluyeron el cloruro del sorbitol y de calcio en el almacenador intermedio de la electroporación. Estos cambios dieron lugar al volumen creciente de la célula que pudo haber contribuido al resultado de una eficiencia más alta de la transformación. Las cantidades cada vez mayores de DNA también dieron lugar a eficiencia creciente de la transformación.

Otro protocolo de la transformación de la levadura pide el uso de LiAc/SS, así como la descarga eléctrica del calor. Un pulso de alto voltaje se administra durante la electroporación a las células de levadura que han sido calor chocado en presencia de la DNA de una sola fila de la onda portadora, DNA del plásmido, y glicol de polietileno (ESPIGA). El protocolo se puede terminar en 30 minutos.

Protoplastos de la instalación

Las instalaciones de la naranja dulce (C.sinensis) se pueden regenerar de los protoplastos del callo embryogenic de la instalación. Este rasgo se ha explotado para producir híbridos numerosos.

Los investigadores optimizaron la eficiencia de la electroporación de los protoplastos derivados de una variedad de células embryogenic de la naranja dulce, antes de que electroporated los en presencia de las construcciones diseñadas para producir las instalaciones fluorescentes.

Posteriormente, regeneraron callos protoplasto-derivados en las instalaciones. Esto trabaja demuestra la utilidad y la flexibilidad de la técnica de la electroporación en protoplastos de la instalación.

Fuentes:

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Last Updated: Feb 26, 2019

Dr. Catherine Shaffer

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Dr. Catherine Shaffer

Catherine Shaffer is a freelance science and health writer from Michigan. She has written for a wide variety of trade and consumer publications on life sciences topics, particularly in the area of drug discovery and development. She holds a Ph.D. in Biological Chemistry and began her career as a laboratory researcher before transitioning to science writing. She also writes and publishes fiction, and in her free time enjoys yoga, biking, and taking care of her pets.

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