Usando o Cytometry de fluxo para analisar glóbulos periféricos

O uso do cytometry de fluxo na pesquisa hematológica cresceu imensa ao longo dos últimos anos. Esta técnica analítica é capaz de fornecer a informação qualitativa e quantitativa sobre as proteínas e as glicoproteína de superfície actuais em eritrócites, em leucócito e em plaqueta.

Glóbulos brancos - uma ilustração por Sebastian Tomus

Sebastian Tomus | Shutterstock

Cytometry de fluxo e análise do eritrócite

Doença do Rhesus

Uma das aplicações as mais amplamente utilizadas do cytometry de fluxo é a análise das pilhas vermelhas fetal actuais dentro do sangue materno. Em particular, o cytometry de fluxo é usado frequentemente diagnosticar a doença (Rh) do Rhesus nas mulheres gravidas, que podem ser detectadas como um antígeno (Rh) de Rhesis.

Os antígenos do Rh são expressados como uma parte de um complexo da proteína na membrana de glóbulos vermelhos (RBCs). São acreditados para jogar um papel em manter a integridade da membrana do RBC.

Para detectar a doença do Rhesus, etiquetada fluorescente anticorpos ao antígeno do Rh, assim como aqueles que são dirigidas contra a hemoglobina F, pode ser combinada com o cytometry de fluxo. Este método é tècnica superior ao teste tradicional de Kleihauer-Betke usado para o diagnóstico da doença do Rhesus, porque é mais preciso e sensível em sua capacidade para distinguir pilhas fetal das pilhas vermelhas adultas que indicam pequenas quantidades da hemoglobina F.

Forma de avaliação do RBC

A membrana de glóbulo do vermelho joga um papel crucial na deformação celular, um processo que seja essencial para a troca do oxigênio dentro dos RBC maduros.

Este processis influenciado por uma variedade de características celulares, incluindo a geometria celular e a viscosidade citoplasmática. As doenças tais como o diabetes, a insuficiência renal terminal, a sepsia e estados inflamatórios agudos fazem com que os RBC exibam uma forma mais esférica em relação aos RBC disco-dados forma normais.

O cytometry de fluxo é útil aqui, porque pode detectar todas as alterações da forma nos RBC para identificar mecanismos da doença e a probabilidade de um paciente que desenvolve uma condição particular.  

Por exemplo, o cytometry de fluxo usado para categorizar RBC esféricos pode determinar se os pacientes do diabetes são mais suscetíveis às condições microvascular do diabético, tais como a nefropatia do diabético. Para a análise da forma do RBC, o cytometry de fluxo é um seguro, um rapid e uma técnica altamente reprodutível.

CytoDiff e análise de WBC

CytoDiff é um método de contagem diferencial cytometric do fluxo novo que utilize um cocktail do reagente de 5 color/6-antibody e um algoritmo auto-bloqueando para diferenciar 18 populações brancas (WBC) do glóbulo, de que pode incluir explosões, imunoglobulina (IGs) e subconjuntos do linfócito.

Com a capacidade para contar aproximadamente 20.000 WBCs, CytoDiff fornece umas capacidades significativamente mais precisas da contagem de células comparadas aos processos manuais da contagem de células é usado. É uma técnica altamente sensível, específica e rápida que seja aplicada clìnica para o diagnóstico e a monitoração da leucopenia, da sepsia ou do cancro metastático.

Análise da plaqueta

A análise da plaqueta pelo cytometry de fluxo pode ser conseguida com os ambos dirige ou ensaios plaqueta-associados indirectos da imunoglobulina. O cytometry de fluxo joga um papel crucial no diagnóstico do purpura thrombocytopenic imune (ITP), que é uma desordem genética que faça com que o consumo da plaqueta seja acelerado.

Infelizmente, desde que as plaqueta são relativamente pequenas, incolores e baixas na quantidade comparada a outras populações do glóbulo, são frequentemente difíceis de contar e caracterizar, especialmente nos pacientes de ITP que já exibem umas mais baixas contagens de plaqueta.

Por este motivo, o cytometry de fluxo foi encontrado para ser um método sensível para a plaqueta que conta, assim como para a detecção de imunoglobulina plaqueta-associada G (PAIgm), que é um marcador para crianças com ITP.

Conclusão

Apesar do tipo da amostra, o cytometry de fluxo fornece uma maneira útil para que os clínicos meçam ràpida características intracelulares para o diagnóstico de vários estados da doença, assim como monitorem a eficácia dos tratamentos para estas circunstâncias.

Fontes

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Last Updated: Jun 28, 2019

Benedette Cuffari

Written by

Benedette Cuffari

After completing her Bachelor of Science in Toxicology with two minors in Spanish and Chemistry in 2016, Benedette continued her studies to complete her Master of Science in Toxicology in May of 2018. During graduate school, Benedette investigated the dermatotoxicity of mechlorethamine and bendamustine, which are two nitrogen mustard alkylating agents that are currently used in anticancer therapy.

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