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Méthodes de purification de virus

Il y a plusieurs voies d'épurer des virus. Ils sont donnés ci-après.

Ultracentrifugation

L'ultracentrifugation est employée pour séparer des macromolécules dans différentes parties des éléments basées sur la taille des particules dans le mélange. Les différents genres de particules telles que des virus, des bactéries, et des organelles ont différentes tailles et seront pilotés à partir de l'axe centrifuge dans le matériel à l'emplacement différent en conséquence. C'est sédimentation appelée de vitesse.

Un liquide visqueux tel que le glycérol, le sucrose, ou le sulfate de cellufine, fourni par des compagnies telles qu'AMSBIO, est employé dans le procédé pour aider à régler le régime du transfert des différents genres de particules ou bien la vitesse de leur transfert à partir de l'axe sera trop rapide. Un régime plus lent de transfert aide à épurer mieux le mélange. L'objectif habituel est pour que le virus déménage de l'axe à mi-chemin par le gradient.

Des virus tels que le virus respiratoire syncytial humain, une infection respiratoire qui affectent principalement des mineurs et des enfants, peuvent être séparés par l'ultracentrifugation. Au lieu du sucrose, l'iodixanol est employé comme support de gradient avec du sulfate de magnésium employé comme agent stabilisant et acide éthylènediaminetétracétique de chélateur (EDTA) pour aider à décomposer le virus en composantes.

illustration générique de virus

 

Une forme alternative de la densité isopycnic appelée de centrifugation peut également être employée, qui sépare des molécules basées sur leur densité de poussée d'Archimède dans le liquide visqueux. Le liquide a une densité plus grande au bas qu'au haut. Quand le mélange est centrifugé, les particules, y compris les molécules de virus, émigrent au niveau du liquide qui associe à leur densité.

Une combinaison de sédimentation de vitesse et de centrifugation isopycnic de densité peut être une forme particulièrement utile de la purification.

Chromatographie

La chromatographie est utile pour les virus d'envelopper et non-enveloppés d'épuration. On enveloppe la plupart des virus qui signifient qu'ils font couvrir leur acide nucléique (ADN et ARN) dans un panneau de protéine appelé le capsid qu'autre a une enveloppe de membrane là-dessus.

Les exemples des virus enveloppés sont le virus de la varicelle et le virus de la grippe. les virus Non-enveloppés n'ont pas l'enveloppe. Les exemples de ces virus non-enveloppés sont virus de parvovirus et d'adeno. des virus Non-enveloppés ne sont pas influencés par la chaleur, le séchage ou les acides tandis que des virus enveloppés peuvent être affectés par ces derniers.

Le niveau de la purification varie d'un virus au prochain. La taille de pore a un choc sur quelle quantité de virus est enlevé et ainsi fait le genre de résine, de solution de protéine, et de tampon. Il est également plus difficile de retirer de plus petits virus entièrement avec cette méthode.

Quelques fléaux emploient le phosphate de calcium, habituellement à pH7. Des régimes d'élution peuvent être changés en modifiant le niveau de pH et en influençant la concentration en phosphate.

Un exemple d'un virus qui peut être traité avec cette méthode est le virus de la grippe. La pureté peut être améliorée par le fois 30 à 100. Davantage d'amélioration peut être apportée en utilisant un fléau de chromatographie complémentaire qui peut améliorer la concentration par le fois 10 à 30.

Précipitation

C'est une méthode où un sel tel que le sulfate d'ammonium est ajouté aux niveaux d'une solution de protéine à saturation jusqu'à ce que les précipités de virus. La quantité de sel ajoutée pour réaliser ceci doit être notée soigneusement. Cette méthode épure la protéine. Elle peut être employée avec les virus enveloppés et non-enveloppés.

D'autres facteurs peuvent également affecter à quel point des travaux de cette méthode tels que la température, le pH, les concentrations protéiques, et les agents de précipitation.

Nanofiltration

Nanofiltration est un procédé de séparation de membrane qui comporte la diffusion d'une solution par une membrane d'une taille très petite de pore. Cette méthode peut être employée pour les virus enveloppés et les virus non-enveloppés. Il est particulièrement bon pour obtenir de petites particules.

Il plus fréquemment a été employé comme purification pour les produits de plasma qui contiennent des virus tels que l'hépatite B et l'hépatite C depuis le début des années 1990. Il est vu comme bonne méthode de séparer à l'extérieur tous les virus dans le plasma et d'aide pour leur éviter les barres entrantes de plasma humain.

Références

  1. http://www.els.net/WileyCDA/ElsArticle/refId-a0002969.html
  2. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2486346/
  3. http://www.microbiologyresearch.org/search?value1=virus+purification+techniques&option1=all&option2=pub_serialIdent&value2=&operator2=AND
  4. http://www2.gsu.edu/~biotkf/bio475/475lab3.htm  

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Last Updated: Feb 26, 2019

Deborah Fields

Written by

Deborah Fields

Deborah holds a B.Sc. degree in Chemistry from the University of Birmingham and a Postgraduate Diploma in Journalism qualification from Cardiff University. She enjoys writing about the latest innovations. Previously she has worked as an editor of scientific patent information, an education journalist and in communications for innovative healthcare, pharmaceutical and technology organisations. She also loves books and has run a book group for several years. Her enjoyment of fiction extends to writing her own stories for pleasure.

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