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Métodos da purificação do vírus

Há diversas maneiras de refinar vírus. São esboçados abaixo.

Ultracentrifugation

O Ultracentrifugation é usado para separar macromoléculas nos elementos diferentes baseados no tamanho das partículas na mistura. Os tipos diferentes das partículas tais como vírus, bactérias, e organelles têm tamanhos diferentes e serão conduzidos longe da linha central centrífuga no equipamento aos lugar diferentes em conformidade. Isto é chamado sedimentação da velocidade.

Um líquido viscoso tal como o glicerol, a sacarina, ou o sulfato do cellufine, disponível das empresas tais como AMSBIO, é usado no processo para ajudar a controlar a taxa de migração dos tipos diferentes das partículas ou então a taxa de sua migração longe da linha central será demasiado rápida. Uma taxa mais lenta de migração ajuda a refinar melhor a mistura. O alvo usual é para que o vírus mova-se da linha central para incompletamente com o inclinação.

Os vírus tais como o vírus syncytial respiratório humano, uma infecção respiratória que afectam principalmente infantes e crianças, podem ser separados pelo ultracentrifugation. Em vez da sacarina, o iodixanol é usado como o media do inclinação com o sulfato de magnésio usado como um agente de estabilização e o ácido ethylenediaminetetraacetic de agente chelating (EDTA) para ajudar a dividir o vírus em componentes.

ilustração genérica do vírus

 

Um formulário alternativo da densidade isopícnica chamada centrifugação pode igualmente ser usado, que separa as moléculas baseadas em sua densidade da flutuabilidade no líquido viscoso. O líquido tem uma densidade maior na parte inferior do que na parte superior. Quando a mistura é centrifugada, as partículas, incluindo as moléculas do vírus, migram ao nível do líquido que se relaciona a sua densidade.

Uma combinação de sedimentação da velocidade e de centrifugação isopícnica da densidade pode ser um formulário particularmente útil da purificação.

Cromatografia

A cromatografia é útil para vírus envolvidos e não-envolvidos refinar. A maioria de vírus são envolvidos que significam que têm seu ácido nucleico (ADN e RNA) coberto em uma tampa da proteína chamada o capsid que mais adicional tem um envelope da membrana nele.

Os exemplos de vírus envolvidos são o vírus da varicela e o virus da gripe. os vírus Não-envolvidos não têm o envelope. Os exemplos destes vírus não-envolvidos são vírus do parvovirus e do adeno. os vírus Não-envolvidos não estão impactados pelo calor, pela secagem ou pelos ácidos quando os vírus envolvidos puderem ser afectados por estes.

O nível de purificação varia de um vírus ao seguinte. O tamanho do poro tem um impacto em quanto do vírus seja removido e assim que faz o tipo da resina, da solução da proteína, e do amortecedor. É igualmente mais difícil remover inteiramente os vírus menores com este método.

Algumas colunas usam o fosfato de cálcio, geralmente em pH7. As taxas da eluição podem ser mudadas alterando o nível do pH e impactando a concentração do fosfato.

Um exemplo de um vírus que possa ser tratado com este método é o virus da gripe. A pureza pode ser melhorada pela dobra 30 a 100. Uma melhoria mais adicional pode ser feita empregando uma coluna de cromatografia adicional que possa melhorar a concentração pela dobra 10 a 30.

Precipitação

Este é um método onde um sal tal como o sulfato do amónio esteja adicionado a uma solução da proteína aos níveis da saturação até que os precipitates do vírus. A quantidade de sal adicionada para conseguir isto precisa de ser notada com cuidado. Este método refina a proteína. Pode ser usado com os vírus envolvidos e não-envolvidos.

Outros factores podem igualmente afectar como bom este método trabalha como a temperatura, o pH, as concentrações da proteína, e os agentes da precipitação.

Nanofiltration

Nanofiltration é um processo da separação de membrana que envolva a difusão de uma solução através de uma membrana com um tamanho muito pequeno do poro. Este método pode ser usado para vírus envolvidos e vírus não-envolvidos. É particularmente bom para obter partículas pequenas.

Foi usado mais freqüentemente como uma purificação para os produtos do plasma que contêm vírus tais como a hepatite B e a hepatite C desde o 90s adiantado. É visto como um bom método de separar para fora todos os vírus no plasma e da ajuda impedir-lhes estoques humanos entrando do plasma.

Referências

  1. http://www.els.net/WileyCDA/ElsArticle/refId-a0002969.html
  2. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2486346/
  3. http://www.microbiologyresearch.org/search?value1=virus+purification+techniques&option1=all&option2=pub_serialIdent&value2=&operator2=AND
  4. http://www2.gsu.edu/~biotkf/bio475/475lab3.htm  

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Last Updated: Feb 26, 2019

Deborah Fields

Written by

Deborah Fields

Deborah holds a B.Sc. degree in Chemistry from the University of Birmingham and a Postgraduate Diploma in Journalism qualification from Cardiff University. She enjoys writing about the latest innovations. Previously she has worked as an editor of scientific patent information, an education journalist and in communications for innovative healthcare, pharmaceutical and technology organisations. She also loves books and has run a book group for several years. Her enjoyment of fiction extends to writing her own stories for pleasure.

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