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Métodos de la purificación del virus

Hay varias maneras de purificar virus. Abajo los contornean.

Ultracentrifugación

La ultracentrifugación se utiliza para separar las macromoléculas en diversas piezas basadas en la talla de las partículas en la mezcla. Diversas clases de partículas tales como virus, bacterias, y organelos tienen diversas tallas y serán impulsadas lejos del eje centrífugo en el equipo a las ubicaciones diferentes por consiguiente. Esto se llama sedimentación de la velocidad.

Un líquido viscoso tal como glicerol, sucrosa, o sulfato del cellufine, disponible de las compañías tales como AMSBIO, se utiliza en el proceso para ayudar a controlar el índice de migración de las diversas clases de partículas o bien el índice de su migración lejos del eje será demasiado rápido. Un índice más lento de migración ayuda a purificar mejor la mezcla. El objetivo usual está para que el virus se mueva desde el eje a hasta la mitad con el gradiente.

Los virus tales como virus sincitial respiratorio humano, una infección respiratoria que afectan principal a niños y a niños, pueden ser separados por la ultracentrifugación. En vez de la sucrosa, el iodixanol se utiliza como el ambiente del gradiente con el sulfato de magnesio usado como un agente que se estabiliza y el ácido etilendiaminotetracético del agente quelante (EDTA) para ayudar a analizar el virus en componentes.

ejemplo genérico del virus

 

Una forma alternativa de la densidad isopícnica llamada centrifugación puede también ser utilizada, que separa las moléculas basadas en su densidad de la flotabilidad en el líquido viscoso. El líquido tiene una mayor densidad en la parte inferior que en la capota. Cuando se centrifuga la mezcla, las partículas, incluyendo las moléculas del virus, emigran al nivel del líquido que se relaciona con su densidad.

Una combinación de la sedimentación de la velocidad y de la centrifugación isopícnica de la densidad puede ser una forma determinado útil de la purificación.

Cromatografía

La cromatografía es útil para los virus de envueltos y no-envueltos de la purificación. Se envuelven la mayoría de los virus que significan que hacen su ácido nucléico (DNA y ARN) revestir en una tapa de la proteína llamada el capsid que más futuro tiene un envolvente de la membrana en él.

Los ejemplos de virus envueltos son el virus de la varicela y el virus de gripe. los virus No-envueltos no tienen el envolvente. Los ejemplos de estos virus no-envueltos son virus del parvovirus y del adeno. los virus No-envueltos no son afectados por el calor, la sequedad o los ácidos mientras que los virus envueltos pueden ser afectados por éstos.

El nivel de purificación varía a partir de un virus al siguiente. La talla del poro tiene un impacto en cuánto del virus se quita y así que hace la clase de resina, de solución de la proteína, y de almacenador intermedio. Es también más difícil quitar virus más pequeños completo con este método.

Algunas olumnas utilizan el fosfato de calcio, generalmente en pH7. Los regímenes de la elución pueden ser cambiados alterando el nivel del pH y afectando la concentración del fosfato.

Un ejemplo de un virus que pueda ser tratado con este método es el virus de gripe. La pureza se puede perfeccionar por el doblez 30 a 100. Mejora adicional puede ser llevada a cabo empleando una olumna de cromatografía adicional que pueda perfeccionar la concentración por el doblez 10 a 30.

Precipitación

Esto es un método donde una sal tal como sulfato del amonio se agrega a una solución de la proteína a los niveles de la saturación hasta que los precipitados del virus. La cantidad de sal adicional para lograr esto necesita ser observada cuidadosamente. Este método purifica la proteína. Puede ser utilizado con los virus envueltos y no-envueltos.

Otros factores pueden también afectar como de bien a trabajos de este método tales como la temperatura, el pH, las concentraciones de la proteína, y los agentes de la precipitación.

Nanofiltration

Nanofiltration es un proceso de la separación de membrana que implica la difusión de una solución a través de una membrana con una talla muy pequeña del poro. Este método se puede utilizar para los virus envueltos y los virus no-envueltos. Es determinado bueno para obtener pequeñas partículas.

Se ha utilizado más con frecuencia como purificación para los productos del plasma que contienen virus tales como hepatitis B y hepatitis C desde el 90s temprano. Se ve como buen método de separar fuera cualquier virus en el plasma y de ayuda prevenirlas las existencias humanas del plasma que entran.

Referencias

  1. http://www.els.net/WileyCDA/ElsArticle/refId-a0002969.html
  2. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2486346/
  3. http://www.microbiologyresearch.org/search?value1=virus+purification+techniques&option1=all&option2=pub_serialIdent&value2=&operator2=AND
  4. http://www2.gsu.edu/~biotkf/bio475/475lab3.htm  

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Last Updated: Feb 26, 2019

Deborah Fields

Written by

Deborah Fields

Deborah holds a B.Sc. degree in Chemistry from the University of Birmingham and a Postgraduate Diploma in Journalism qualification from Cardiff University. She enjoys writing about the latest innovations. Previously she has worked as an editor of scientific patent information, an education journalist and in communications for innovative healthcare, pharmaceutical and technology organisations. She also loves books and has run a book group for several years. Her enjoyment of fiction extends to writing her own stories for pleasure.

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