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¿Qué la electroforesis del gel implica?

La electroforesis del gel es una técnica ampliamente utilizada en los laboratorios de ciencias de la vida para separar las macromoléculas tales como DNA, ARN, y proteínas. En esta técnica, se separan las moléculas basaron en su talla y carga eléctrica. La electroforesis del gel se realiza generalmente en laboratorios para analizar la DNA, el ARN, o muestras de la proteína de diversas fuentes.

Las muestras de la DNA del cargamento sobre una agarosa se gelifican para la electroforesis
Las muestras de la DNA del cargamento sobre una agarosa se gelifican para la electroforesis - derechos de autor de la imagen: foto de la ciencia, identificación de la imagen: 214331152 vía Shutterstock.com

Principios de la electroforesis del gel

La técnica de la electroforesis del gel explota la diferencia de tamaño y la carga de diversas moléculas en una muestra. La muestra de la DNA o de la proteína que se separará se carga conectado a un gel poroso colocado en un ambiente iónico del almacenador intermedio. En el uso de la carga eléctrica, cada molécula que tiene diversas talla y carga se moverá a través del gel a diversas velocidades.

El gel poroso usado en esta técnica actúa como criba molecular que separe moléculas más grandes las más pequeñas. Moléculas más pequeñas se mueven más rápidamente a través del gel mientras que los más abultados se dejan detrás. La movilidad de las partículas también es controlada por su carga eléctrica individual. Dos electrodos opuesto cargados que son parte de las moléculas del tirón del sistema hacia de ellas en base de su carga.

¿Cómo trabaja?

El gel usado en electroforesis del gel se hace generalmente de un material llamado la agarosa, que es una substancia gelatinosa extraída de alga marina. Este gel poroso se podía utilizar para separar las macromoléculas de muchas diversas tallas. El gel se sumerge en una solución tampón de la sal en una cámara de la electroforesis. El Tris-borato-EDTA (TBE) es de uso general como el almacenador intermedio. Su función principal es controlar el pH del sistema. La cámara tiene dos electrodos - uno positivo y otra negativa - en sus dos extremos.

Las muestras que necesitan ser analizadas entonces se cargan en pozos minúsculos en el gel con la ayuda de una pipeta. Una vez que el cargar es completo, una corriente eléctrica de 50-150 V es aplicada. Ahora, las moléculas cargadas presentes en la muestra comienzan a emigrar a través del gel hacia los electrodos. - Las moléculas cargadas se mueven hacia el electrodo positivo y positivo - las moléculas cargadas emigran negativo hacia el electrodo negativo.

La velocidad a la cual cada molécula viaja a través del gel se llama su movilidad electroforética y es determinada principal por su carga neta y talla. Las moléculas fuertemente cargadas mueven más rápidamente que débil cargados. Moléculas más pequeñas ejecutan más rápidamente irse detrás las más grandes. Así, carga y tamaño pequeño fuertes aumentos la movilidad electroforética de una molécula, mientras que carga débil y disminuciones de gran tamaño la movilidad de una molécula. Cuando todas las moléculas en una muestra están del mismo tamaño, la separación será basada solamente en su talla.

Una vez que la separación es completa, el gel se mancha con un tinte para revelar las bandas de la separación. El bromuro de etidio es un tinte fluorescente de uso general en electroforesis del gel. El gel se empapa en una solución diluida del bromuro de etidio y después se coloca en un transilluminator ULTRAVIOLETA para visualizar las bandas de la separación.

Las bandas se examinan o se fotografían inmediatamente para la referencia futura, pues difundirán en el gel en un cierto plazo.  El tinte se puede también cargar en el pozo del gel por adelantado para rastrear la migración de las moléculas mientras que suceso.

Usos de la electroforesis del gel

La electroforesis del gel es ampliamente utilizada en los laboratorios de la biología molecular y de la bioquímica en áreas tales como ciencia forense, biología del conservational, y remedio.

Algunos usos dominantes de la técnica son mencionados abajo:

  • En la separación de fragmentos de la DNA para que huella dactilar genética Investigue escenas del crimen
  • Para analizar resultados de la reacción en cadena de polimerasa
  • Para analizar los genes asociados a una enfermedad determinada
  • En la DNA que perfila para que estudios de la taxonomía distingan diversa especie
  • En la prueba de la paternidad usando la huella dactilar genética
  • En el estudio de la estructura y de la función de proteínas
  • En el análisis de la resistencia antibiótico
  • En las técnicas que borran para el análisis de macromoléculas
  • En el estudio de lazos evolutivos analizando semejanza genética entre poblaciones o especie

Referencias

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Last Updated: Aug 23, 2018

Susha Cheriyedath

Written by

Susha Cheriyedath

Susha has a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Chemistry and Master of Science (M.Sc) degree in Biochemistry from the University of Calicut, India. She always had a keen interest in medical and health science. As part of her masters degree, she specialized in Biochemistry, with an emphasis on Microbiology, Physiology, Biotechnology, and Nutrition. In her spare time, she loves to cook up a storm in the kitchen with her super-messy baking experiments.

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