Che cosa sono Affimers?

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Gli anticorpi sono stati il metodo più popolare per lo studio dell'espressione della proteina e funzione per le decadi passate, ma sono stati inseguiti da mancanza di convalida e dalla redditività difficile costantemente della generazione degli anticorpi nuovi.

Le proteine di Affimer rappresentano un gruppo di proteine obbligatorie alternative che possono essere usate per studiare l'espressione e la funzione della proteina.

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L'immagine mostra un anticorpo (oggetto blu) e il affimer (oggetto arancio) per dimostrare le differenze di complessità e di dimensione. Credito di immagine: Scienze biologiche di Avacta

Come è Affimers ha fatto?

Affimers proviene dall'unità per generare i metodi alternativi di studio l'associazione e della funzione della proteina, che possono complementare le informazioni fornite dagli anticorpi.

Come tipo di reagente di affinità, i affimers sono impalcature biophysically stabili delle proteine che possono essere riutilizzate. Affimers può essere fatto da due impalcature: Impalcature di Adhiron ed impalcature umane dello stefin A.

L'impalcatura dello stefin A è costruita dalla proteina umana dello stefin A, mentre Adhiron è sintetico. La proteina sintetica di Adhiron originalmente è stata fatta dalla sequenza del cystatin ed è molto termicamente stalla. Le impalcature dello stefin e di Adhiron A sono riferite strutturalmente.

Per selezionare un affimer appropriato, schermante è fatto per trovare i reagenti adatti per la proteina bersaglio. Le sequenze codificante scelte poi sono clonate in un vettore di espressione in Escherichia coli e la proteina recombinante è stata depurata nel corso di una settimana. Ciò tiene conto la generazione di proteine di alta qualità per le diverse applicazioni.

Che cosa sono le applicazioni di Affimers?

Affimers può combinarsi con le prove biologiche tradizionali per aumentare la nostra comprensione delle proteine. Per esempio, i affimers sono stati utilizzati nelle analisi di affinità, tra l'altro. Egualmente sono stati utilizzati in biosensori e nelle colture cellulari per manipolare la segnalazione delle cellule. Affimers si è applicato con successo sia in vitro che in vivo.

Alcune delle applicazioni che sono state provate facendo uso dei affimers includono la rappresentazione delle cellule, la microscopia eccellente di risoluzione, la modulazione di funzione della proteina, la formazione magnetica di nanoparticella e lo sviluppo del reagente di MRI.

Affimers con la specificità migliorata per tubulina è stato utilizzato nella microscopia eccellente di risoluzione con alto successo e può mirare alle regioni della struttura della tubulina che gli anticorpi sono in genere limitati da.

È probabile che le più applicazioni saranno scoperte in futuro come l'uso dei affimers diventa più diffuso. Per esempio, grazie alle librerie crescenti dei affimers, è stato possibile creare i microarrays di affinità per scoprire i biomarcatori ed i prodotti farmaceutici di potenziale.

Trovando i biomarcatori, i affimers si sono applicati agli studi del cancro, dove sono stati usati per mirare ad una proteina nella formazione dell'imbarcazione del tumore chiamata il ricevitore di VEGF.

Che cosa sono i vantaggi di Affimers?

Affimers è piccolo nella dimensione, stabile alle gamme di temperature differenti, relativamente facile da generare ed offre le opportunità supplichevoli di complementare le imperfezioni degli anticorpi.

Il loro di piccola dimensione è probabilmente uno degli attributi che rendono i affimers più sensibili degli anticorpi una volta utilizzato nella macchiatura istochimica, poichè possono penetrare meglio i tessuti.

Affimers è sia disponibile nel commercio che può essere sintetizzato dai diversi laboratori facendo uso di pubblicamente - i metodi disponibili, quindi assicurante lo è accessibili in intera comunità scientifica.

Un vantaggio chiave dei affimers, rispetto agli anticorpi o ai nanobodies, è la velocità a cui possono essere schermati e sviluppati. Il processo di vagliatura per i affimers comprende le tre ripetizioni di visualizzazione dei fagi e delle analisi di ELISA.

Ciò può essere effettuata in 12 giorni, che è significativamente di meno che il momento necessario per l'anticorpo ed i tempi animali nanobody di inoculazione. Ancora, il processo di vagliatura tramite cui i reagenti obbligatori sono identificati è più efficiente perché le proteine bersaglio sono schermate in uno stato profilatura.

Imperfezioni e sviluppo futuro

Affimers è isolato in genere il più con successo quando gli antigeni di alta qualità sono usati. Questi sono presentati via biotina o streptavidin sulle piastrine e sulle perle. Tuttavia, l'isolamento di determinate proteine recombinanti può essere più provocatorio. Per esempio, le proteine SH2 espresse in cellule di mammiferi sono provocatorie estrarre.

Il successo della selezione adatta del affimer facendo uso degli antigeni commerciali sembra dipendere dalla sorgente, poichè soltanto determinate marche sembrano essere possibili per i affimers.

Sorgenti

  1. Tiede C, et al. (2017). Le proteine di Affimer sono reagenti versatili e rinnovabili di affinità. eLife. https://doi.org/10.7554/eLife.24903
  2. Roberts J.P. (2013). I biomarcatori catturano la tappa centrale. https://www.genengnews.com/magazine/202/biomarkers-take-center-stage/
  3. Bedford R, et al. (2017). Reagenti alternativi agli anticorpi nelle applicazioni di rappresentazione. Rassegne di Biophyiscal. https://doi.org/10.1007/s12551-017-0278-2

Last Updated: Sep 24, 2019

Sara Ryding

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Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

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