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Que são Affimers?

Faixa clara a:

Os anticorpos foram o método o mais popular para estudar a expressão da proteína e função para as décadas passadas, mas foram pertinazes pela falta da validação e pela rentabilidade deficiente constantemente de gerar anticorpos novos.

As proteínas de Affimer representam um grupo de proteínas obrigatórias alternativas que podem ser usadas para estudar a expressão e a função da proteína.

A imagem mostra um anticorpo (objeto azul) e o affimer (objeto alaranjado) para demonstrar as diferenças do tamanho e da complexidade. Crédito de imagem: Ciências da vida de Avacta
A imagem mostra um anticorpo (objeto azul) e o affimer (objeto alaranjado) para demonstrar as diferenças do tamanho e da complexidade. Crédito de imagem: Ciências da vida de Avacta

Como é Affimers fez?

A haste de Affimers da movimentação para gerar métodos alternativos de estudar o emperramento da proteína e a função, que podem complementar a informação forneceu por anticorpos.

Como um tipo de reagente da afinidade, os affimers são andaimes biophysically estáveis das proteínas que podem ser reúso. Affimers pode ser feito de dois andaimes: Andaimes de Adhiron e andaimes humanos do stefin A.

O andaime do stefin A é projectado da proteína humana do stefin A, visto que Adhiron é sintético. A proteína sintética de Adhiron foi feita originalmente da seqüência do cystatin, e é muito tèrmica estábulo. Os andaimes de Adhiron e de stefin A são relacionados estrutural.

Para seleccionar um affimer apropriado, selecionando é feita para encontrar reagentes apropriados para a proteína do alvo. As regiões de codificação escolhidas são clonadas então em um vector da expressão em Escherichia Coli, e a proteína de recombinação foi refinada no curso de uma semana. Isto permite a geração das proteínas de alta qualidade para aplicações diversas.

Que são as aplicações de Affimers?

Affimers pode ser combinado com os testes biológicos tradicionais para aumentar nossa compreensão das proteínas. Por exemplo, os affimers foram usados em ensaios da afinidade, entre outros. Foram usados igualmente nos biosensors e nas culturas celulares para manipular a sinalização da pilha. Affimers foi aplicado com sucesso in vitro e in vivo.

Algumas das aplicações que foram testadas usando affimers incluem a imagem lactente da pilha, a microscopia super da definição, a modulação da função da proteína, a formação magnética do nanoparticle, e do reagente de MRI revelação.

Affimers com especificidade aumentada para o tubulin foi usado na microscopia super da definição com sucesso alto, e pode visar regiões da estrutura do tubulin que os anticorpos são tipicamente restritos de.

É provável que mais aplicações estarão descobertas no futuro como o uso dos affimers se torna mais difundido. Por exemplo, agradecimentos às bibliotecas crescentes dos affimers, foi possível criar microarrays da afinidade para descobrir biomarkers e fármacos do potencial.

Encontrando biomarkers, os affimers foram aplicados aos estudos do cancro, onde foram usados para visar uma proteína na formação da embarcação do tumor chamada o receptor de VEGF.

Que são as vantagens de Affimers?

Affimers é pequeno em tamanho, estável nas variações da temperatura diferentes, relativamente fácil de gerar, e oferece oportunidades atraentes de complementar os defeitos dos anticorpos.

Seu tamanho pequeno é provavelmente um dos atributos que fazem affimers mais sensíveis do que anticorpos quando usado na mancha histochemical, porque podem penetrar tecidos melhor.

Affimers é disponível no comércio e pode ser sintetizado por laboratórios individuais usando-se publicamente - os métodos disponíveis, assegurando desse modo o são acessíveis à comunidade científica inteira.

Uma vantagem chave dos affimers, ao contrário dos anticorpos ou dos nanobodies, está a uma velocidade em que podem ser seleccionados e desenvolvido. O processo de selecção para affimers envolve três iterações do indicador do fago e dos ensaios de ELISA.

Este pode ser realizado em 12 dias, que é significativamente menos do que o momento necessário pelo anticorpo e tempos animais nanobody da inoculação. Além disso, o processo de selecção por que os reagentes obrigatórios são identificados é mais eficiente porque as proteínas do alvo são seleccionadas em um estado dobrado.

Defeitos e revelação futura

Affimers é isolado tipicamente o mais com sucesso quando os antígenos de alta qualidade são usados. Estes são apresentados através da biotina ou do streptavidin em placas e em grânulos. Contudo, o isolamento de determinadas proteínas de recombinação pode ser mais desafiante. Por exemplo, as proteínas SH2 expressadas em pilhas mamíferas são desafiantes extrair.

O sucesso da selecção apropriada do affimer que usa antígenos comerciais parece depender da fonte, porque somente determinados tipos parecem ser viáveis para affimers.

Fontes

  1. Tiede C, e outros (2017). As proteínas de Affimer são reagentes versáteis e renováveis da afinidade. eLife. https://doi.org/10.7554/eLife.24903
  2. Roberts J.P. (2013). Os Biomarkers tomam o lugar central. https://www.genengnews.com/magazine/202/biomarkers-take-center-stage/
  3. Bedford R, e outros (2017). Reagentes alternativos aos anticorpos em aplicações da imagem lactente. Revisões de Biophyiscal. https://doi.org/10.1007/s12551-017-0278-2

Last Updated: Sep 24, 2019

Sara Ryding

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Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

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