Aviso: Esta página é uma tradução automática da página original em inglês. Por favor note uma vez que as traduções são geradas por máquinas, não tradução tudo será perfeita. Este site e suas páginas da Web destinam-se a ler em inglês. Qualquer tradução deste site e suas páginas da Web pode ser imprecisas e imprecisos no todo ou em parte. Esta tradução é fornecida como uma conveniência.

Que são controles de carga?

O parafusamento ocidental é um método bem conhecido que seja confiado actualmente sobre em laboratórios de biologia para determinar as proteínas específicas e sua abundância dentro de uma amostra dada de pilhas ou de tecido.

Mancha ocidental

Crédito de imagem: SINITAR/Shutterstock.com

Os controles de carga são uma parte essencial do processo ocidental da mancha, e são necessários para que as interpretações exactas sejam feitas.

O controle de carga é uma proteína, geralmente uma que exibe a expressão constitutiva de nível elevado dentro do tipo da amostra ou da pilha sob a investigação. As proteínas tais como o beta-actínio ou o GADPH são aquelas com expressões altas e ubíquos que são de uso geral como controles de carga.

Estas proteínas são usadas para indicar a carga igual das amostras através de todos os poços. Igualmente expressam transferência apropriada das proteínas na membrana durante o processo de mancha ocidental.

Totais, estas proteínas são uma exigência poder determinar exactamente a expressão da proteína na mancha ocidental e ler precisamente resultados.

Por que os controles de carga necessários para ocidental estão borrando?

Os controles de carga servem finalidades numerosas em uma investigação ocidental da mancha. São usados essencialmente para normalizar os níveis de proteína detectados dentro de uma amostra assegurando-se de que a carga da proteína seja a mesma através do gel. Abaixo, as quatro razões principais pelas quais os controles de carga são cruciais são esboçadas.

Em primeiro lugar, os controles de carga fornecem um método da quantificação, permitindo pesquisadores de calcular a proteína atingem em cada pista quando não foram carregados uniformente. Para fazer esta, a densidade da faixa de controle da carga é usada para corrigir para as diferenças na carga.

Transferência igual é a segunda aplicação de controles de carga em manchas ocidentais. É vital que quando as comparações são feitas entre a expressão da proteína de amostras diferentes, cada amostra teve mesmo transferência do gel à membrana através do gel inteiro. Os controles de carga são usados para verificar estas transferências.

A interpretação da mancha ocidental resulta as faces um desafio particular quando um grande número pistas estão sendo executadas simultaneamente. Porque as proteínas dentro das pistas exteriores do gel obtêm transferidas nas membranas posicionadas perto do quadro, esta pode conduzir ao efeito de borda, onde há mais variação na ligação nas bordas em comparação com o resto do gel. Os controles de carga podem significar se este ocorreu e pode permitir que os pesquisadores corrijam para ele.

Finalmente, a maioria de projectos de investigação procuram ser publicados em jornais ilustres. Estes jornais exigem a pesquisa encontrar determinados critérios, tais como que aquela os pesquisadores devem fornecer o forte evidência para suas conclusões. Os controles incluídos dentro das metodologias da pesquisa ajudam o presente um argumento para o forte evidência.

Vantagens de controles de carga

Não inclui controles de carga ao realizar técnicas ocidentais da mancha pode conduzir para pesquisar a publicação porque não se verifica. Conseqüentemente, uma vantagem de incluir controles de carga é que a pesquisa encontra os critérios para ser publicada.

Também, os controles de carga adicionam ao nível de qualidade dos dados recolhidos como ele podem ser benéficos na correcção para erros e em assegurar a precisão da informação usada para fazer conclusões vitais. Resultados inconsequentes ou incorrectos do limite de controles da carga, e conseqüentemente projectos de investigação tempo e dinheiro da salvaguarda em tornar a colocar em funcionamento procedimentos.

Totais, os controles de carga aumentam a confiança e a eficiência do método ocidental da mancha e permitem estudos usando os para encontrar os critérios para ser publicada.

Tipos de controles de carga

Actualmente, as proteínas numerosas são usadas como controles de carga. O tipo de proteína escolhido para o uso em um estudo dependerá frequentemente do que estão sendo investigadas e do que é procurado ser encontrado da amostra. Os controles os mais populares são:

Actínio

a Inteiro-pilha e as aplicações citoplasmáticas do extracto são perfeitas para o uso do actínio. Contudo, porque é um componente da acção do músculo, não pode ser usado em amostras do músculo esqueletal. O actínio existe em muitos formulários, fazendo o incredibly versátil.

Beta-Actínio (kDa 42)

Um formulário popular do actínio é Beta-Actínio (kDa 42). Pode ser usado nas amostras de todos os tipos eucarióticas da pilha, que é porque é uma escolha popular da amostra da carga. Adicionalmente, seus níveis da expressão não variam significativamente devido ao tratamento celular, fazendo outra vez lhe um controle extensamente apropriado.

GAPDH

A desidrogenase de fosfato do Glyceraldehyde 3, conhecida como GAPDH, é uma inteiro-pilha e um controle de carga citoplasmática do extracto. Igualmente actua como um catalizador para a divisão de moléculas da glicose e do carbono. Seu nível da expressão varia entre tecidos, que é um factor importante a ter quando considerando ela como um controle de carga.

Porin

Porin é o mais de uso geral nas amostras de proteínas mitocondriais. É uma proteína aníon-selectiva tensão-dependente do canal que seja um componente de tipos numerosos do tecido.

Lamin B1

Lamin B1 é considerado jogar um papel na estabilidade nuclear dentro de uma pilha. É apropriado como um controle de carga para envelopes nucleares da proteína, mas deve somente ser usado se o envelope nuclear está disponível.

TBP

A proteína Tata-obrigatória, conhecida como TBP, é uma proteína obrigatória da transcrição que trabalhe com polimerase de RNA II. É um outro controle de carga comum para proteínas nucleares.

Sumário

Para medir exactamente a expressão da proteína e ler resultados ocidentais da mancha, o uso de controles de carga é essencial. Estas proteínas são usadas para aumentar a confiança e a eficiência totais do método ocidental da mancha e permitem que os estudos encontrem os critérios para a publicação. Quando os controles de carga numerosos existirem, alguma do mais comum inclui o actínio (particularmente o formulário do Beta-Actínio), o GAPDH, Porin, Lamin B1 e TBP.

Fontes:

  Eaton, S., Roche, S., Llavero Hurtado, M., Oldknow, K., Farquharson, C., Gillingwater, T. e Wishart, T. (2013). Análise da proteína total como um controle de carga seguro para a mancha ocidental fluorescente quantitativa. PLoS UM, 8(8), p.e72457. https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0072457

  Ghosh, R., Gilda, J. e Gomes, A. (2014). A necessidade de e as estratégias para melhorar a confiança na precisão de manchas ocidentais. Revisão perita de Proteomics, 11(5), pp.549-560. https://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1586/14789450.2014.939635

  Murphy, R. e cordeiro, G. (2013). Considerações importantes para análises da proteína usando técnicas anticorpo-baseadas: resultados de mancha ocidentais de redução do tamanho dos acima-tamanhos. O jornal da fisiologia, 591(23), pp.5823-5831. https://physoc.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1113/jphysiol.2013.263251

Further Reading

Last Updated: Feb 7, 2020

Sarah Moore

Written by

Sarah Moore

After studying Psychology and then Neuroscience, Sarah quickly found her enjoyment for researching and writing research papers; turning to a passion to connect ideas with people through writing.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Moore, Sarah. (2020, February 07). Que são controles de carga?. News-Medical. Retrieved on September 21, 2021 from https://www.news-medical.net/life-sciences/What-are-Loading-Controls.aspx.

  • MLA

    Moore, Sarah. "Que são controles de carga?". News-Medical. 21 September 2021. <https://www.news-medical.net/life-sciences/What-are-Loading-Controls.aspx>.

  • Chicago

    Moore, Sarah. "Que são controles de carga?". News-Medical. https://www.news-medical.net/life-sciences/What-are-Loading-Controls.aspx. (accessed September 21, 2021).

  • Harvard

    Moore, Sarah. 2020. Que são controles de carga?. News-Medical, viewed 21 September 2021, https://www.news-medical.net/life-sciences/What-are-Loading-Controls.aspx.

Comments

The opinions expressed here are the views of the writer and do not necessarily reflect the views and opinions of News Medical.