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¿Cuáles son mandos de cargamento?

El asegurar con pernos occidental es un método establecido que se confía actualmente conectado en los laboratorios de biología para determinar las proteínas específicas y su abundancia dentro de una muestra dada de células o del tejido.

Mancha blanca /negra occidental

Haber de imagen: SINITAR/Shutterstock.com

Los mandos de cargamento son una parte esencial del proceso occidental de la mancha blanca /negra, y son necesarios para que las interpretaciones exactas sean hechas.

El mando de cargamento es una proteína, generalmente una que exhiba la expresión constitutiva de alto nivel dentro del tipo de la muestra o de la célula bajo investigación. Las proteínas tales como beta-actinia o GADPH son ésas con las expresiones altas y ubicuas que son de uso general como mandos de cargamento.

Estas proteínas se utilizan para indicar el cargamento igual de muestras a través de todos los pozos. También expresan la transferencia apropiada de proteínas sobre la membrana durante el proceso que borra occidental.

Totales, estas proteínas son un requisito de poder determinar exacto la expresión de la proteína en borrar occidental y leer exacto resultados.

¿Por qué los mandos de cargamento necesarios para occidental están borrando?

Los mandos de cargamento responden a propósitos numerosos en una investigación occidental de la mancha blanca /negra. Esencialmente se utilizan para normalizar los niveles de proteína descubiertos dentro de una muestra asegurándose de que el cargamento de la proteína es lo mismo a través del gel. Abajo, se contornean las cuatro razones principales por las que los mandos de cargamento son cruciales.

En primer lugar, los mandos de cargamento ofrecen un método de cuantificación, permitiendo a investigadores calcular la proteína ascienden en cada senda cuando no se han cargado uniformemente. Para hacer esto, la densidad de la banda de mando de cargamento se utiliza para corregir para las diferencias en el cargamento.

Una transferencia igual es el segundo uso de los mandos de cargamento en manchas blancas /negras occidentales. Es vital que cuando las comparaciones se hacen entre la expresión de la proteína de diversas muestras, cada muestra ha tenido incluso una transferencia del gel a la membrana a través del gel entero. Los mandos de cargamento se utilizan para verificar estas transferencias.

La interpretación de la mancha blanca /negra occidental resulta las caras un reto determinado cuando un gran número de sendas se están ejecutando simultáneamente. Porque las proteínas dentro de las sendas exteriores del gel consiguen transferidas en las membranas colocadas cerca del marco, ésta puede dar lugar al efecto de filo, donde hay más variación en atar en los filos con respecto al descanso del gel. Los mandos de cargamento pueden significar si éste ha ocurrido y puede permitir que los investigadores corrijan para él.

Finalmente, la mayoría de los proyectos de investigación intentan ser publicados en gorrones renombrados. Estos gorrones requieren la investigación cumplir ciertas consideraciones, tales como que eso los investigadores deben proporcionar la prueba evidente para sus conclusiones. Los mandos incluidos dentro de metodologías de la investigación ayudan al presente un caso para la prueba evidente.

Ventajas de los mandos de cargamento

El no poder incluir mandos de cargamento al realizar técnicas occidentales de la mancha blanca /negra puede llevar para investigar no ser publicado porque no se verifica. Por lo tanto, una ventaja de incluir mandos de cargamento es que la investigación cumple las consideraciones para ser publicada.

También, los mandos de cargamento agregan al nivel de calidad de los datos cerco como él pueden ser beneficiosos en la corrección para los desvíos y asegurar la exactitud de la información usada para hacer conclusiones vitales. Resultados poco concluyentes o incorrectos del límite de mandos de cargamento, y por lo tanto proyectos de investigación de la salvaguardia tiempo y dinero en la reejecución de procedimientos.

Totales, los mandos de cargamento aumentan la confiabilidad y la eficiencia del método occidental de la mancha blanca /negra y permiten a estudios usando ellas cumplir las consideraciones para ser publicada.

Tipos de mandos de cargamento

Actualmente, las proteínas numerosas se utilizan como mandos de cargamento. El tipo de proteína elegido para el uso en un estudio dependerá a menudo se está investigando de qué y de qué se intenta para ser descubierta de la muestra. Los mandos más populares son:

Actinia

la Entero-célula y los usos citoplásmicos del extracto son perfectos para el uso de la actinia. Sin embargo, porque es un componente de la acción del músculo, no puede ser utilizado en muestras del músculo esquelético. La actinia existe en muchas formas, haciéndolo increíblemente versátil.

Beta-Actinia (kDa 42)

Una forma popular de actinia es Beta-Actinia (kDa 42). Puede ser utilizada en las muestras de todos los tipos eucarióticos de la célula, que es porqué es una opción popular de la muestra del cargamento. Además, sus niveles de la expresión no varían importante debido al tratamiento celular, otra vez haciéndole un mando extensamente conveniente.

GAPDH

La deshidrogenasa de fosfato del gliceraldehído 3, conocida como GAPDH, es una entero-célula y un mando de cargamento citoplásmico del extracto. También actúa como catalizador para la avería de las moléculas de la glucosa y del carbono. Su nivel de la expresión varía entre los tejidos, que es un factor importante a tener en cuenta cuando en vista de ella como mando de cargamento.

Porin

Porin es el más de uso general de las muestras de proteínas mitocondriales. Es una proteína anión-selectiva voltaje-relacionada del canal que es un componente de los tipos numerosos del tejido.

Lamin B1

Lamin B1 se considera desempeñar un papel en estabilidad nuclear dentro de una célula. Es conveniente como mando de cargamento para los envolventes nucleares de la proteína, pero debe ser utilizado solamente si el envolvente nuclear está disponible.

TBP

La proteína Tata-obligatoria, conocida como TBP, es una proteína obligatoria de la transcripción que trabaja con la polimerasa de ARN II. Es otro mando de cargamento común para las proteínas nucleares.

Resumen

Para medir exacto la expresión de la proteína y leer resultados occidentales de la mancha blanca /negra, el uso de los mandos de cargamento es esencial. Estas proteínas se utilizan para aumentar la confiabilidad y la eficiencia totales del método occidental de la mancha blanca /negra y permiten que los estudios cumplan las consideraciones para la publicación. Mientras que existen los mandos de cargamento numerosos, algo del más común incluye la actinia (determinado la forma de la Beta-Actinia), GAPDH, Porin, Lamin B1 y TBP.

Fuentes:

  Eaton, S., Roche, S., Llavero Hurtado, M., Oldknow, K., Farquharson, C., Gillingwater, T. y Wishart, T. (2013). Análisis de la proteína total como mando de cargamento seguro para borrar occidental fluorescente cuantitativo. PLoS UNO, 8(8), p.e72457. https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0072457

  Ghosh, R., Gilda, J. y Gomes, A. (2014). La necesidad de y las estrategias para perfeccionar confianza en la exactitud de manchas blancas /negras occidentales. Revista experta de Proteomics, 11(5), pp.549-560. https://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1586/14789450.2014.939635

  Murphy, R. y cordero, G. (2013). Consideraciones importantes para los análisis de la proteína usando técnicas anticuerpo-basadas: resultados occidentales de reducción de la talla de las hacia arriba-tallas que borran. El gorrón de la fisiología, 591(23), pp.5823-5831. https://physoc.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1113/jphysiol.2013.263251

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Last Updated: Feb 7, 2020

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