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Que são Peptide Aptamers?

Os aptamers do Peptide são os polipeptídeos pequenos, artificiais, que ligam para visar proteínas em uma maneira altamente específica, similares aos anticorpos. Estas proteínas podem ocorrer naturalmente ou podem artificial ser criadas.

Que são Aptamers?

Aptamers foi usado primeiramente na pesquisa que segue sua descoberta nos anos 90 em que Tuerk e o ouro desenvolveram uma metodologia para seleccionar para as ligantes do RNA, que ligam muito especificamente à polimerase de ADN T4. Os primeiros aptamers projetados eram os ácidos nucleicos RNA e ADN.

Contudo, em 1996 os aptamers do peptide foram desenvolvidos. Estes peptides contêm um andaime do peptide limitado a uma região variável do laço (5-20 resíduos por muito tempo), que contenha seqüências de ácido aminado diferentes. Esta região variável do laço tem o abilitiy a reconhecer e ligar às seqüências, visto que o andaime da proteína fornece a flexibilidade e impede o emperramento anormal estabilizando a conformação do laço.

O primeiro andaime da proteína era o thioredoxin de Escherichia Coli. Esta proteína está usada ainda na tecnologia do aptamer da proteína enquanto contem um local activo do laço, que possa ser substituído por uma seqüência variável.

Modelo da molécula do ADN. Crédito de imagem: UGREEN 3S/Shutterstock
Modelo da molécula do ADN. Crédito de imagem: UGREEN 3S/Shutterstock

Isolamento da proteína Aptamers

Uma vez que criados, os aptamers da proteína são isolados geralmente das bibliotecas combinatórias com uma técnica da selecção. São melhorados então com as alterações numerosas, principalmente com as ponto-mutações.

A selecção é feita geralmente pelo sistema do dois-híbrido do fermento, mas pode igualmente ser realizada usando o indicador do fago e uma escala de outros processos sem célula.

No sistema do dois-híbrido do fermento, os aptamers da proteína são preparados e limitados aos domínios da activação Gal4 (rapina), enquanto as seqüências do alvo são limitadas aos domínios Gal4 obrigatórios (isca).

O emperramento e o domínio da activação são exigidos para a transcrição de uma proteína, mas um gene a jusante do repórter pode ser activado com um factor da transcrição que liga a uma seqüência de activação ascendente. Conseqüentemente, se uma proteína da isca e a proteína da rapina ligam, a seguir estes dois domínios venha perto bastante interagir, e o gene do repórter pode ser transcripted.

Contudo, se estas proteínas não interagem então nenhuma transcrição ocorre. Conseqüentemente, os aptamers da proteína que conduzem à transcrição do gene do repórter são as proteínas que são complementares à seqüência desejada.

Alternativamente, no método sem célula do indicador do fago, os polipeptídeos são apresentados na superfície dos bacteriófagos. Estas seqüências podem então seleccionar para e ligar aos polipeptídeos, que são compatíveis com a seqüência pre-selecionada.

Papéis da proteína Aptamers

In vivo, os aptamers ligam naturalmente a seu alvo da proteína e interrompem sua função através de uma variedade de mecanismos, por exemplo, impedindo interacções com outras proteínas. Esta propriedade fez conseqüentemente estes aptamers da proteína úteis na caracterização das proteínas. Por exemplo, podem ser usados como mutagéneos, emperramento e inibição da função do gene do alvo.

Um fenótipo específico pode então ser seleccionado para e este permite a identificação dos aptamers da proteína que criam este fenótipo com da inibição da função da proteína. Isto pode, conseqüentemente, ser usado para identificar a proteína do alvo, seu papel biológico e outras proteínas de interacção.

Os aptamers da proteína conseqüentemente foram usados em muitos campos da pesquisa, por exemplo para a identificação dos genes, que são envolvidos no ciclo de pilha.

Umas revelações mais adicionais igualmente mostraram que estes aptamers podem alterar a localização das proteínas ou a conduzir às alterações anormais do posttranslational, fazendo as ainda mais valiosas na pesquisa.

Estas proteínas podem igualmente ser aplicadas para in vitro a pesquisa. Ligam às proteínas do interesse, permitindo a identificação de uma grande variedade de polipeptídeos, tais como isoforms e alvos activos do anticorpo.

Fontes

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Last Updated: Nov 1, 2018

Hannah Simmons

Written by

Hannah Simmons

Hannah is a medical and life sciences writer with a Master of Science (M.Sc.) degree from Lancaster University, UK. Before becoming a writer, Hannah's research focussed on the discovery of biomarkers for Alzheimer's and Parkinson's disease. She also worked to further elucidate the biological pathways involved in these diseases. Outside of her work, Hannah enjoys swimming, taking her dog for a walk and travelling the world.

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