Che cosa è PCR quantitativa in tempo reale (qPCR)?

La reazione a catena della polimerasi (PCR) è un metodo comunemente usato per ampliare il DNA, che può poi essere usato per clonazione dei geni, ordinando e per manipolazione del gene. La tecnica egualmente si è applicata alla diagnosi di malattia.

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È importante studiare il DNA per stabilire la funzione del gene e l'effetto delle mutazioni sulla malattia. L'analisi del DNA egualmente tiene conto lo sviluppo delle maturazioni. Nella PCR, il DNA è estratto da una cella ed è ampliato, generante migliaia di copie per l'analisi.

L'amplificazione è raggiunta con l'uso dei nucleotidi e dei modelli del RNA conosciuti come le mani di fondo. Un enzima chiamato la polimerasi di Taq estende le mani di fondo facendo uso dei nucleotidi liberi, producendo le copie identiche della regione di interesse.

Che cosa è PCR quantitativa in tempo reale (qPCR)?

La PCR quantitativa in tempo reale (anche conosciuta come qPCR) è un modo di scoprire quanto di una sezione specifica di DNA là è in un campione, in tempo reale. Ciò permette che le sezioni di DNA (o, acidi nucleici) siano schermate simultaneamente.

Usa le tinture fluorescenti non specifiche, o le sonde sequenza-specifiche del DNA che contengono gli oligonucleotidi del fluorescente-reporter (più grandi sequenze di DNA) per individuare i prodotti di PCR mentre sono prodotti. Potere direttamente vedere la presenza di nucleotide specifico può mostrare indipendentemente da fatto che un organismo specifico è presente e può evidenziare le anomalie specifiche del gene, quale il gene di CTFR conosciuto per causare la fibrosi cistica.

La misura del numero degli acidi nucleici specifici presenti può essere fatta in due modi: da quantificazione relativa o da quantificazione assoluta. Le elasticità assolute di quantificazione confronta il campione ad uno standard del DNA per misurare il numero esatto delle molecole del DNA dell'obiettivo presenti. Tuttavia, la quantificazione relativa usa i geni interni di riferimento (geni all'interno del DNA del campione stesso) per determinare la quantità del presente del gene dell'obiettivo.

È il qPCR il migliore metodo di misura del DNA?

La PCR quantitativa in tempo reale è molto sensibile ai cambiamenti nell'espressione del DNA. Ciò è vantaggioso confrontata ad altri metodi correnti, quali i microarrays, poichè il risultato finale può essere veduto prima del punto finale, danti più tempo per ulteriore analisi. Al contrario, il qPCR richiede molto per introdurre il RNA all'inizio della reazione ed è più sensibile digiunare, le reazioni di alto-capacità di lavorazione, che aumenta le probabilità di errore.

Dove è il qPCR comunemente usato?

Nella ricerca e nei laboratori dell'ospedale, il qPCR è utilizzato pricipalmente per la ricerca del DNA e nella diagnosi delle malattie virali, batteriche e genetiche quali cancro e le malattie congenite.

La PCR quantitativa in tempo reale egualmente è utilizzata nell'industria. Per esempio, può essere usata per analizzare il bioburden dei prodotti o delle materie prime quali alimento ed i farmaci. Il metodo può anche essere usato per scoprire indipendentemente da fatto che un prodotto alimentare contiene l'OMG (organismo geneticamente modificato), cercando la presenza di transgene all'interno del DNA del prodotto vegetale.

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Last Updated: Aug 23, 2018

Written by

Phoebe Hinton-Sheley

Phoebe Hinton-Sheley has a B.Sc. (Class I Hons) in Microbiology from the University of Wolverhampton. Due to her background and interests, Phoebe mostly writes for the Life Sciences side of News-Medical, focussing on Microbiology and related techniques and diseases. However, she also enjoys writing about topics along the lines of Genetics, Molecular Biology, and Biochemistry.

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